miR-204通过WNT7A和PAX6对晶状体上皮细胞增殖调控的分子作用和机制探讨

Cataract is the first cause of blindness in the world and the athogenesis is not clear and non-surgical treatment has become a bottleneck. It is reported that miRNAs play important role in the proliferation of lens epithelial cells and the develpoment of cataract. miR-204 is involved in regulation in proliferation, migration and txansdifferentiation of diverse cells. In our study, we constructed miR-204 expression vector activating canonical wnt signaling pathway and used transfection technology to achieve miR-204-overexpressing lens epithelial cells, investigated the influence of miR-204 in EMT and proliferation of lens epithelial cells through WNT7A and PAX6 and its related mechanism. The safety and the molecular biology characteristics of miR-204 may let us find a new way for the therapy of cataract.

白内障是全球首位的致盲疾病，发病机制不明确已成为非手术治疗的一个瓶颈。目前发现一些microRNA(miRNA)在晶状体优势或特异性地表达，与白内障形成密切相关。人们已经证实在晶状体上皮细胞表达的miR-204和一些肿瘤细胞的增殖密切相关。我们使用克隆形成实验、划痕实验、Matrigel胶等检测miR-204过表达对晶状体上皮细胞增殖和运动能力的影响。利用Western blot 和免疫荧光检测miR-204对其靶基因WNT7A和PAX6的影响，分析miR-204在晶状体上皮细胞增殖和移行中的分子特征及其可能的分子作用和网络调控机制旨在发现miR-204对晶状体上皮细胞的调控作用，寻找白内障新的发病机制和预防后发性白内障的最佳途径，为白内障治疗技术的革新提供新思路。

白内障是全球首位的致盲疾病，发病机制不明确已成为非手术治疗的一个瓶颈。目前发现一些microRNA(miRNA)在晶状体优势或特异性地表达，与白内障形成密切相关。本课题组已经发现透明晶状体和发生白内障的晶状体存在一些miRNAs表达的不同。.我们进一步运用PiTcar，Targetscan，MIRanda等算法在因特网上的发布结果查询miRNA-204基因的靶点结果发现其有1100多个靶基因，包括VIM、TIMP3、PNN、VACN和EYA1等。所以我们有理由相信miRNA-204在全身大部分组织中都起到非常重要的调控作用。.晶状体因为其独特的生物学特性是一个非常完美的研究纤维化过程的生物学工具。晶状体纤维化发生白内障是一个慢性过程，涉及多种器官疾病的发展和进展。上皮-间充质转换（EMT）是器官纤维化的重要过程。我们实验工作中使用Northern blot也验证了miRNA-204在晶状体中表达。应用克隆形成实验、划痕实验等实验研究发现miRNA-204可以抑制两个晶状体上皮细胞系（HLE-B3、SRA01/04）的增殖和运动，也能显著抑制晶状体上皮细胞和晶状体的增殖、迁移和体外纤维化。在这里，我们证实miR-204在眼睛发育期间由Pax6调节。Pax6通过直接上调miR-204控制多个基因的下调。同时我们发现了miR-204的一些新靶点，其中包括SoxC家族的亲神经元转录因子Sox11，也是眼睛发育的重要调节因子。同时我们揭示了miR-204受到Pax6的调节抗EMT作用，并且通过抑制WNT信号通路起到抑制晶状体上皮增殖。此外，我们还提供了体外证据，在TGFβ2刺激的EMT中， Wnt/β-catenin信号通路被激活，阻断Wnt/β-catenin信号可以逆转晶状体上皮细胞（LECS）EMT和晶状体纤维化。转录因子Pax6在眼发育过程中既作为激活剂又作为抑制剂的双重作用。本课题组分析了miR-204在晶状体上皮细胞增殖和移行中的分子特征及其可能的分子作用和网络调控机制，发现miR-204对晶状体上皮细胞的调控作用，寻找白内障新的发病机制和预防后发性白内障的最佳途径，为白内障治疗技术的革新提供新思路。