IL-35抑制CIA血管新生及信号传导途径的研究

IL-35是IL-12家族新成员，是一种新型的抑制免疫系统活性的细胞因子，其生物学功能还不清楚，受体和信号传导途径仍未发现。到目前为止关于IL-35对血管新生影响尚无报道。我们前期研究发现IL-35可明显的抑制RA患者FLS活化，明显的下调FLS分泌促血管新生因子VEGF水平，上调抗血管新生因子IP-10水平,我们推测IL-35具有抑制血管新生的作用，这可能是IL-35抑制CIA的一个新机制。为证实这一假说，我们将利用分子生物学、流式细胞仪等技术，通过离体与在体水平研究IL-35对血管新生的影响，对RA滑膜血管新生的影响、对FLS增殖和活化的影响以及对IL-12家族成员受体亚单位表达、JAK/ STATs信号传导系统影响。本研究结果将为寻找RA及血管新生性疾病的药物治疗的新切入点和治疗靶点提供理论与实验依据，对疫苗开发、RA等自身免疫性疾病的防治、抑制肿瘤生长均有重要意义。

IL-35是一种新型的抑炎性细胞因子，是IL-12家族的新成员。它是由EBI3和IL-12的p35亚基共价结合组成的异源二聚体蛋白质。我们认为，它可能参与类风湿关节炎（RA）的发生和发展。本研究通过体外和体内实验观察IL-35与RA和胶原诱导型关节炎(CIA)的关系，探讨IL-35在RA发病中对血管新生的影响。 . 首先，我们研究了IL-35对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖和凋亡的作用。结果发现 IL-35具有抑制HUVEC细胞增殖、诱导HUVEC细胞凋亡的作用，且呈时间和剂量依赖关系；以48 h为作用效果比较理想的时间点。. 其次，我们研究了IL-35对CIA小鼠血管内皮生长因子（VEGF）及其受体的表达。结果发现IL-35降低CIA小鼠关节炎指数和滑膜组织病理学评分。IL-35治疗组CIA小鼠滑膜组织通过免疫组织化学、RT-PCR、Western Blot检测均显示VEGF、Flt-1、Flk-1、vWF表达明显降低。另外，我们的结果还表明，IL-35在CIA形成过程中能够抑制滑膜组织血管新生因子表达。这提示我们，IL-35抑制CIA的发生、发展可能是通过抑制血管新生实现的。同时我们还研究了IL-35对CIA小鼠滑膜细胞JAK/STAT信号传导的影响，发现IL-35作用于CIA小鼠FLS是通过STAT1信号传导，而与STAT3和STAT5信号传导无关。另外，我们又研究了IL-35在RA患者外周血中水平及与疾病活动度的关系。结果发现RA患者外周血血清中的IL-35浓度明显高于健康对照组，RA患者血清中IL-35的浓度与炎性指标（ESR、CRP）、疾病活动度DAS28、相关抗体（RF、CCP）无相关性。. 研究中我们还发现了RA患者血清中的IL-35浓度与骨代谢标志物β-CTX水平呈负相关，与25-(OH)VitD3及骨密度（BMD）水平呈正相关。这提示IL-35可能参与了RA的骨破坏的发生。因此我们还初步研究了IL-35与骨破坏因子的关系，发现CIA组小鼠关节滑膜组织IL-17、 RANKL表达明显升高，OPG表达降低，差异有统计学意义；经过IL-35治疗后，小鼠关节滑膜组织IL-17、RANKL表达明显减低，OPG表达升高，与CIA组比较，差异有统计学意义。以上研究表明，IL-35参与RA的发生和发展，并且有抑制RA骨破坏的作用。