三黄煎剂基于Aurora激酶A抑制调控乳腺癌细胞分裂与血管成熟的实验研究

Based on the primary effects of San Huang Jian Ji on the inhibition of breast cancer cell proliferation, anti-angiogenesis and anti-inflammation with experimental and clinical results, as well as more than 10 years researches of angiogenesis in the group and collaboration with the advanced process of Harvard University, the project will explore the mechanisms of San Huang Jian Ji in the pathways of breast cancer cell division and vessel maturation in order to find its relationships with breast cancer cell metastasis by targeting Aurora kinase-A inhibition. In order to find the key targets, the Aurora kinase A gene silencing technique will be applied inside. Furthermore, the reversal effects of the breast cancer chemotherapy and endocrine treatment resistance with San Huang Jian Ji will be evaluated through intervening in the expression of Aurora kinase A in breast cancer cells. In summary, the project puts forward a novel way with the interference of Sanhuang Jianji to reverse the resistance of anti-cancer therapy in modern medicine where difficulties focused, which shows the advantages of TCM.

本研究在三黄煎剂抑制乳腺癌细胞增殖、炎症反应与血管新生的前期实验与临床基础上，结合本项目组10余年血管新生的基础，并与哈佛大学合作，进一步揭示三黄煎剂调控Aurora激酶A的作用机制并探查其抑制乳腺癌细胞分裂周期与血管新生后成熟及肿瘤转移的相关关系，以Aurora激酶A基因沉默技术探讨三黄煎剂的作用靶点，同时探索三黄煎剂通过干预Aurora激酶A逆转乳腺癌化疗与内分泌治疗耐药的作用。 本项目以新型Aurora激酶A为作用靶点，发挥中医药抗癌同时逆转现代医学抗癌治疗耐药的难点特色优势，开创出中医药治疗乳腺癌的新途径。

Aurora 激酶A在乳腺恶性肿瘤中过表达，是乳腺癌靶向治疗的新靶点。三黄煎剂前期临床研究已证实能够改善患者氧化应激状态，降低乳腺癌患者全身炎症反应，抑制血管新生,本研究在前期基础上探讨三黄煎剂干预Aurora 激酶A调控乳腺癌细胞生长与干预其血管生成的作用机制。.主要研究内容：三黄煎剂干预下乳腺癌MDA-MB231、MCF-7细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭功效测定及相关蛋白的表达，并基于干预Aurora-A表达与沉默初步探索了内在机制；同时对人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）的迁移、管腔形成及其VEGF分泌、转录水平进行测定，探索其干预血管生成作用与机制。三黄煎剂与他莫昔芬及表柔比星协同作用进行测定；三黄煎剂制备标准及质谱测定，进一步进行了三黄煎剂干预他莫昔芬耐药细胞及PI3K-mTOR信号通路机制探索。.重要结果：三黄煎剂能够呈浓度依赖性的抑制乳腺癌细胞增殖，诱导凋亡，抑制黏附、迁移、侵袭。特异性siRNA静默 AURKA后，增殖抑制率下降50%。提示超过50%功效通过下调ARUKA的mRNA及蛋白表达实现。三黄煎剂抑制AURKA表达，下调VEGF转录水平抑制乳腺癌血管新生。CAM实验、裸鼠移植瘤实验验证三黄煎剂抑制乳腺癌血管新生及Aurora A、VEGF的调节通路。三黄煎剂能够协同增加他莫昔芬、表柔比星对乳腺癌细胞的增殖抑制率、凋亡率，调节凋亡相关蛋白的表达。三黄煎剂的质控标准：大黄素11.3微克/毫升；姜黄素2微克/毫升；毛蕊异黄酮葡萄糖苷192.07微克/毫升。三黄煎剂能调节PI3K/AKT信号通路，抑制氧化应激水平，抑制他莫昔芬耐药细胞增殖，4mg/ml与8mg/ml的三黄煎剂分别将MCF-7/TAMR细胞的凋亡率上调2.48%、4.97%。.关键数据：发表核心期刊论文10篇，其中SCI论文3篇，获江苏省中医院科技进步奖一等奖1项，培养博士研究生2人，硕士研究生8人，参加国内会议交流4次，国际会议主旨发言2次。.科学意义：三黄煎剂可以基于调控AURORA激酶抑制乳腺癌血管新生，改善乳腺癌内分泌治疗耐药，因而具有广阔的临床运用前景。