三黄煎剂基于抑制Aurora激酶A调节NF-κB信号通路影响乳腺癌血管新生的机制研究

Based on the primary result of basic research that San Huang Decoction inhibited angiogenesis of breast cancer cells, we continue to verify this effect of San Huang Decoction in vivo. Moreover, through knockdown and overexpression of Aurora kinase A (AURKA), we further discuss the target of San Huang Decoction on inhibiting tumor angiogenesis in breast cancer, and its correlation with regulation of NF-κB signal pathway..This research puts AURKA as the target to exert the advantage of traditional Chinese medicine of preventing recurrence and metastasis of breast cancer, initiating a new way for the research on prevention and treatment with traditional Chinese medicine of breast cancer.

本研究在三黄煎剂抑制乳腺癌细胞血管新生的前期基础上，在体内水平验证三黄煎剂对乳腺癌血管新生的影响。并通过Aurora激酶A(Aurora kinase A, AURKA)基因敲减与过表达，进一步探讨三黄煎剂抑制乳腺癌血管新生的作用靶点，并初步探讨与NF-κB信号通路调节的相关性。. 本项目以Aurora激酶A为研究靶点，发挥中医药预防乳腺癌复发、转移的特色优势，为中医药防治乳腺癌的研究提供新的思路。

乳腺癌是女性常见恶性肿瘤，Aurora激酶A（Aurora kinase A, AURKA) 在人类恶性肿瘤细胞中过度表达，并参与多种肿瘤相关转录因子如NF-κB、AKT通路的激活，是肿瘤分子靶向治疗的关键靶点。本研究在前期研究基础上，在体内外水平验证三黄煎剂对乳腺癌血管新生的影响。并通过AURKA基因敲减，进一步探讨三黄煎剂抑制乳腺癌血管新生的作用靶点，并初步探讨与NF-κB信号通路调节的相关性。.我们通过测定乳腺癌细胞诱导下HUVECs的迁移率、管腔形成数量，乳腺癌细胞VEGF分泌及mRNA表达水平，在体外水平验证三黄煎剂对乳腺癌细胞血管新生的抑制作用。通过建立裸鼠皮下Matrigel栓荷瘤模型及CAM乳腺癌细胞种植模型，测定Matrigel栓血管数量、Matrigel栓切片CD31免疫荧光强度，AURKA、VEGF表达水平，及CAM模型中血管数，在体内水平验证三黄煎剂对乳腺癌血管新生的抑制作用。通过测定乳腺癌细胞AURKA蛋白、 mRNA表达水平，AURKA免疫荧光标记有丝分裂纺锤体形成和中心体分离，直观评价三黄煎剂对AURKA表达的抑制作用。建立AURKA敲减乳腺癌细胞模型，并在此基础上通过测定HUVECs迁移实验、管腔形成实验，测定乳腺癌细胞VEGF分泌量及mRNA表达水平，在体外水平验证三黄煎剂通过下调AURKA抑制乳腺癌细胞血管新生。在下调AURKA表达基础上，三黄煎剂在裸鼠皮下Matrigel栓荷瘤模型中对Matrigel栓中血管数、Matrigel栓切片CD31免疫荧光强度的影响，AURKA、VEGF表达水平，以及CAM模型中血管数，在体水平验证三黄煎剂通过下调AURKA抑制乳腺癌血管新生。通过免疫荧光标记筛选出三黄煎剂抑制NF-κB表达水平更显著的细胞系（MDA-MB-231细胞），并在沉默NF-κB基础上，通过HUVECs迁移实验、管腔形成实验，MDA-MB-231细胞VEGF分泌量及mRNA表达水平测定，在体外水平初步证实三黄煎剂基于下调AURKA抑制NF-κB信号通路，从而抑制乳腺癌细胞血管新生。.研究结果显示三黄煎剂能够基于下调AURKA抑制NF-κB信号通路活性，从而降低VEGF转录水平，抑制乳腺癌血管新生。本项目以AURKA为研究靶点，发挥中医药预防乳腺癌复发、转移的特色优势，为中医药防治乳腺癌的研究提供新的思路。