Rab32调控树突状细胞交叉递呈过程中吞噬体回运途径的机制研究

树突状细胞吞噬并降解外来抗原，生成的抗原表位肽与MHC分子结合，并回运到细胞膜刺激T细胞活化，是启动获得性免疫应答的基本过程。此过程涉及吞噬体成熟和降解产物回运两个胞内转运环节。由于吞噬体逐步酸化成熟到溶酶体是其内容物完全降解的过程，故抗原表位肽-MHC分子复合物从吞噬体系统转运到回运途径是抗原递呈中的一个关键步骤。我们前期筛选树突状细胞交叉递呈相关的Rab分子，首次观察到Rab32可能是吞噬体降解产物转运到回运途径的关键分子。在此基础上，本项目拟采用活细胞示踪表位肽-MHC I类分子复合物技术，实时观察Rab32对吞噬体回运过程的影响；鉴定Rab32相互作用蛋白，分析Rab32参与吞噬体回运过程的分子机制；进一步了解病原相关分子模式的信号通路调控 Rab32相关的吞噬体回运过程，从而探讨树突状细胞交叉递呈过程中囊泡回运的分子机制，为增强抗原表位肽-MHC复合物回运的疫苗合理设计奠定基础。

首先采用大规模siRNA技术筛选参与树突状细胞抗原递呈的SNARE蛋白家族分子， 发现下调STX3、STX17和STX18表达显著抑制树突状细胞抗原递呈能力，下调Bet1L、Vtila、Sec20表达能够促进树突状细胞抗原递呈能力；其次采用串联亲和纯化技术完成54个囊泡转运相关分子Rab 蛋白的相互作用蛋白鉴定，采用改进的ComPASS 打分方法，鉴定了458 个高可信蛋白相互作用对，聚类分析鉴定了可发现多个Rab 蛋白复合体；再次通过高通量qPCR 分析树突状细胞成熟过程Rab 表达变化，发现Rab10、32、33a 表达上调，Rab3c、4a、27a、35 表达下调，细胞影像分析显示LPS、CpG、PolyI:C 刺激树突状细胞，Rab32 分布发生显著变化，构建了树突状细胞特异性启动子siRNA 下调Rab32 小鼠，发现其抗原递呈缺陷，随后完成树突状细胞Rab32 特异性敲出小鼠的构建，并且在Lm细菌感染模型检观察在病毒感染过程中Rab32的作用，发现Rab32 KD小鼠的抗细菌能力减弱，提示Rab32可能通过抑制交叉递呈途径参与抗细菌免疫。有关研究结果拟投送高影响因子SCI杂志，尚有1篇相关SCI论文已接受，基本完成规定的研究内容。