花生根瘤菌吸氢基因表达与调控的研究

以高吸氢的花生根瘤菌株L8-3为出发菌株，提取amHI不完全酶切，分离约20kb的DNA片段，与克隆载体pLAFR3连接，经体外包装、转导、涂布平板，挑出约1万个克隆子。经PCR和DNA杂交研究结果表明，重组质粒含有所需的吸氢基因。对含吸氢基因的重组质粒pRAL55进行酶切分析，测得该重组质粒约为42kb，并构建其酶切物理图谱，推测吸氢结构基因片段可能在EcoRI酶切的6.4kb片段，该片段含有三个酶切片段。采用三亲杂交法，将含有吸氢基因的重组质粒转移到无吸氢活性的花生根瘤菌的诱变株和野生株，以及毛豆根瘤菌，得到相应的结合株在自生条件下均能诱导出吸氢活性，回接花生和毛豆，其根瘤吸氢活性明显比受体株的高。