肿瘤细胞释放自噬小体(TRAP)诱导Tfh样细胞及其调节Breg产生对卵巢癌的免疫调节作用与机制研究

Tfh cells and Breg cells were intimately associated with the growth, metastasis and prognosis of epithelial ovarian cancer, but their emergence and the relationship in tumor microenvironment is still unclear..Our previous study shows that, Tumor-released Secretory Autophagosome (TRAP) could induce the B cell into Breg (IL-10↑) with the function of immunosuppression. And recently study shows that, TRAP can also induce Tfh cell (IL-21↑) and promote the generation of Breg cells, but the mechanism need to be further studied..This program will investigate: ①The molecular mechanism of TRAP-induced Tfh cell polarization(which ligand, receptor and signaling pathways upregulate IL-21?); ②TRAP/ Tfh cells promote the formation of Breg and its immunoregulation mechanism (Mechanism of up-regulation of IL-10?) ; ③The effect of TRAP / Tfh /Breg in the growth and metastasis of ovarian cancer and its molecular mechanism (using mouse ovarian cancer model and clinical ovarian cancer tissue and patient cases)..To clarify the formation mechanism of " TRAP→DAMPs-IL-21+ Th cell → Breg cell" in the microenvironment of ovarian cancer, and provide a new approach for immunotherapy of ovarian cancer.

Tfh及Breg细胞均与卵巢癌的生长、转移和预后密切相关，但二者在肿瘤微环境中的形成及相关关系尚未完全清楚。. 我们前期研究显示：肿瘤细胞释放的自噬小体(TRAP)能诱导B细胞成为具有免疫抑制功能的Breg(IL-10↑)。近期发现：TRAP可以诱导CD4+T细胞极化为Tfh细胞(IL-21↑)并促进Breg形成，其机制有待深入研究。. 本项目拟探讨：①TRAP诱导Tfh细胞极化及其分子机制(何种配体、受体和信号通路上调IL-21？)；②TRAP/Tfh细胞促进Breg形成及其免疫调节机制(何种方式和信号通路诱导Breg？)；③TRAP/Tfh/Breg对卵巢癌体内外生长和转移的作用及其分子机制(采用小鼠卵巢癌模型、临床卵巢癌组织及患者病例)。阐明卵巢癌微环境中“TRAP→IL-21+Tfh细胞→IL-10+Breg细胞”免疫调节网络形成机制，为卵巢癌免疫调节与治疗提出新的思路。

背景：卵巢癌（OC）是最常见的妇科恶性肿瘤之一，其中上皮性卵巢癌（EOC）占卵巢癌的85%-90%。CD4+ T细胞是抗肿瘤免疫的关键效应因子，但肿瘤细胞如何影响CD4+ T细胞的效应因子功能尚不完全清楚。肿瘤细胞释放的自噬小体（TRAPs）被认为是肿瘤进展过程中宿主抗肿瘤免疫的关键调节因子。我们探讨了TRAPs在肿瘤微环境中调节CD4+ T细胞的机制方面，并研究人EOC腹水中TRAPs数量及患者腹水中IL-6水平与EOC患者肿瘤风险的关系。.方法：将从肿瘤细胞系、胸腔积液或腹水中分离的TRAPs与CD4+ T细胞孵育，检测TRAPs在CD4+ T细胞分化和功能中的功能和机制。在小鼠模型中及EOC患者腹水中，检测TRAPs诱导的CD4+ T细胞抑制效应T细胞功能，促进肿瘤发生和转移。.结果：肿瘤患者恶性积液和肿瘤细胞系的TRAPs表面的HSP90α通过TLR2-MyD88-NF-κB信号级联刺激CD4+ T细胞产生IL-6。TRAPs诱导的自分泌IL-6进一步通过STAT3促进CD4+ T细胞分泌IL-10和IL-21。值得注意的是，TRAPs诱导的CD4+ T细胞以IL-6-和IL-10依赖的方式抑制CD4+和CD8+效应T细胞的功能，并通过IL-6、IL-10和IL-21诱导IL-10产生的调节性B细胞（Bregs），从而促进肿瘤的生长和转移。同样，CD4+ T细胞抑制TRAPs形成或IL-6分泌可显著延缓肿瘤生长。此外，B细胞或CD4+ T细胞的消耗通过增加效应T细胞的功能来抑制肿瘤的生长。在25例EOC患者腹水中TRAPs的数量和HSP90α+TRAPs的百分比与腹水中IL-6的水平呈正相关。同时，在腹水中，罗马指数与IL-6水平呈正相关。此外，人卵巢癌细胞系TRAPs和EOC腹水能够诱导CD4+ T细胞产生高水平IL-6，而封闭TRAPs表面HSP90α和封闭CD4+ T表面TLR2会抑制IL-6的分泌。.结论：TRAPs表面的HSP90α调控CD4+ T细胞的免疫抑制功能，促进肿瘤的生长和转移。EOC患者腹水中TRAPs水平和HSP90α+ TRAPs百分比与高水平IL-6相关。在来自人EOC的TRAPs上的HSP90α可以通过TLR2刺激CD4+ T细胞产生IL-6。