番茄热稳定型根结线虫抗性基因的克隆

在野生秘鲁番茄中存在根结线虫抗性基因Mi-3，其抗性表现为温度稳定性，它比温度敏感（28℃以上抗性丧失）的Mi-1基因更具应用价值。目前，尽管Mi-1已被克隆和鉴定，但Mi-3仍未被克隆，只是定位在第12染色体上。Mi-3基因的克隆和鉴定，可揭示其特异的抗性机理，对于丰富抗性基因资源具有重要的理论意义和实践价值。本项目将利用含Mi-3抗性基因的野生秘鲁番茄为材料，根据业已定位结果，结合最新的番茄基因组测序进展和信息，先对其进行精细定位，再候选出阳性BACs，从中候选出Mi-3的ORFs，进行ORFs的基因功能验证及抗性鉴定，分析其与Mi-1的抗性机理差异，获得基因工程番茄抗性种质。

本项目已按计划完成预期目标。其主要工作要点如下：通过生物信息学分析，对Mi-3候选基因进行了精确的定位；筛选了4个Mi-3候选基因，并对其进行了克隆，载体构建与遗传转化。同时选取了根结线虫寄生相关的3个基因作为靶基因构建RNAi载体，转化了番茄，并评价了转基因植株对根结线虫的抗性，结果表明借助RNAi技术干涉根结线虫寄生相关基因，增强转基因番茄对根结线虫的抗性是可行的。