MFG-E8介导的凋亡清除在慢性阻塞性肺疾病（COPD）发病中的作用

多个研究证实慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者肺部凋亡细胞明显增加，乳脂球表皮生长因子Ⅷ（MFG-E8）在吞噬细胞和凋亡细胞之间起桥连作用，促进凋亡细胞的吞噬清除，对维持机体的内环境稳定起重要作用。我们曾研究发现适量MFG-E8通过结合凋亡细胞表面的磷脂酰丝氨酸，介导凋亡细胞清除，可减轻急性肺损伤，拮抗炎症反应，改善动物生存；本课题从凋亡清除分子MFG-E8出发，采用COPD患者、MFG-E8基因敲除小鼠、高表达MFG-E8小鼠、单核巨噬细胞系来研究MFG-E8在COPD发病中的作用机制，MFG-E8不足,导致凋亡清除减少、继发坏死，导致失控性炎症反应和COPD的发病。适度增加MFG-E8有望促进凋亡清除和COPD肺部炎症消退,阻抑COPD的早期病变。

目的：探索MFG-E8在COPD发病中的表达变化以及MFG-E8是否通过影响COPD发病中巨噬细胞对凋亡细胞的清除这一机制进而参与到COPD发病之中。.方法：.1. 收集COPD病人及年龄性别匹配健康对照，ELISA检测血浆中MFG-E8、IL-1β、TGF-β的表达水平，结合病人资料进行统计学分析。.2. 给予MFG-E8敲除小鼠和野生小鼠香烟烟雾暴露刺激3、6、9个月，HE染色评价小鼠肺脏内病理改变。Westernblot、ELISA 检测小鼠血液及肺脏组织中MFG-E8表达，Westernblot 、Tunnel检测小鼠肺脏内凋亡情况。.3. 香烟烟雾提取物（CSE）刺激RAW264.7细胞、腹腔巨噬细胞、肺泡巨噬细胞，Westernblot、ELISA 检测MFG-E8表达。.4．CSE刺激rmMFG-E8 预处理的RAW264.7细胞并与荧光微球或凋亡细胞共孵育，评价其吞噬能力改变，Real-time PCR检测rmMFG-E8对CSE刺激的RAW264.7细胞促炎性因子的表达的影响。.5．rmMFG-E8预处理RAW264.7细胞并给予CSE刺激后，免疫荧光法检测Rac1在细胞内的定位。.结果： .1. COPD患者外周血浆MFG-E8表达显著降低，TGF-β表达显著升高而IL-1β表达无显著性差异(p<0.01)。COPD患者GOLDⅠ至GOLD Ⅳ外周血中MFG-E8表达水平逐渐下降(p=0.02)。COPD患者外周血MFG-E8表达水平与FEV1% predicted呈明显正相关(p<0.01)，与患者每年吸烟数量呈明显的负相关(p=0.02)。.2. 香烟烟雾暴露小鼠肺脏及血清中MFG-E8表达降低，同时肺脏内凋亡细胞聚集增多，MFG-E8敲除后可显著增加熏烟小鼠肺脏内凋亡细胞聚集。.3. 而在细胞学水平，CSE刺激可降低多种巨噬细胞MFG-E8的表达，在CSE刺激下，外源性给予重组MFG-E8可部分恢复RAW264.7细胞的吞噬功能，降低炎性反应，恢复Rac1在CSE刺激RAW264.7细胞膜上的定位。.研究意义：本课题首次发现MFG-E8在COPD中的表达变化，香烟暴露是MFG-E8降低的重要因素之一，MFG-E8参与调节CSE暴露下巨噬细胞的吞噬作用及炎性反应。以上研究为COPD的发生发展及新靶点的探索提供了新思路。