NDY1调控let-7b影响EZH2表达促进卵巢癌侵袭转移的机制研究

Epigenetic modification is the new focus of tumor mechanism study.By changing some of the key points in the abnormal modification, it is possible to reverse the process of tumorigenesis. In our previous studies we have confirmed that NDY1 and EZH2 are overexpression in ovarian cancer tissue. Down-regulating EZH2 expression can inhibit proliferation and migration of ovarian cancer cells. The preliminary results show that NDY1 may play a role in ovarian cancer by regulating EZH2. To clear the mechanism of regulating EZH2 by NDY1 is the problem which we expect to solve .The studies found that let-7b involved the process of EZH2 regulationg by NDY1.The project will observed the expression of let-7b and EZH2 after changing NDY1 expression levels; observed EZH2 expression after changing the expression of let-7b;observed the influnece of EZH2 expression by let-7b after enhancing NDY1 expression while suppressing the expression of let-7b. The project aims to clear NDY1/let-7b / EZH2 pathway and its mechanism of cell biology behavior; to investigate the relationship between NDY1/let-7b / EZH2 from different levels including tissues cells and bodies,which provide new ideas for exploring the pathogenesis of ovaian cancer.

表观遗传学修饰是目前肿瘤研究的焦点，通过改变异常修饰中的某些关键因素，有可能逆转肿瘤的发生。我们前期研究证实NDY1和EZH2在卵巢癌组织高表达，下调EZH2的表达可以抑制卵巢癌细胞增殖和迁移，初步说明NDY1可能通过调节EZH2在卵巢癌侵袭转移中发挥作用。进一步明确NDY1通过何种机制调节EZH2成为我们期待解决的问题。研究发现let-7b参与了NDY1调控EZH2的中间过程，为探明三者间的关系，本项目通过改变NDY1表达水平，观察let-7b及EZH2的表达；改变let-7b的表达观察对EZH2表达的影响，升高NDY1表达的同时抑制let-7b表达观察对EZH2表达的影响，明确NDY1/let-7b/ EZH2通路对细胞生物学行为的影响及其作用机制，从细胞、组织和体内等不同层面探讨NDY1/let-7b/ EZH2之间的关系，为探索卵巢癌的发病机制提供新的思路。

背景：组蛋白去甲基化酶KDM2B(又称NDY1)，是重要的表观调控因子，参与多种肿瘤的发生发展。EZH2具组蛋白甲基转移酶活性，其表达异常可促肿瘤异常生长。非编码微小RNA let-7b，具抑癌基因活性，在多种恶性肿瘤中低表达。卵巢癌中，三者的关系及作用仍不明确。.研究内容：检测正常卵巢、卵巢良性肿瘤、交界性肿瘤及卵巢癌中KDM2B 、let-7b、EZH2 的表达，分析三者与卵巢癌临床病理特征的相关性。 在卵巢癌细胞中：沉默和上调KDM2B，检测let-7b、EZH2 的表达及细胞增殖迁移的能力；改变 let-7b 的表达，检测细胞增殖迁移的能力，并检测 let-7b 低表达时EZH2的表达；同时上调KDM2B及let-7b，检测EZH2的表达及细胞功能的变化。研究KDM2B调控let-7b，let-7b作用EZH2的机制。构建卵巢癌裸鼠移植瘤模型，研究KDM2B、let-7b及EZH2三者对卵巢癌成瘤的影响。.结果：卵巢癌中，KDM2B、EZH2在组织中高表达，let-7b低表达；KDM2B的表达与EZH2呈正相关，let-7b与EZH2则负相关；KDM2B及EZH2的表达与肿瘤组织分级、FIGO 分期及淋巴结转移呈正相关，与患者年龄无关，let-7b的表达则呈负相关，与患者年龄无关。卵巢癌细胞中，沉默KDM2B基因能上调let-7b的表达，并伴随EZH2的下降；相反，上调KDM2B表达，let-7b的表达则下降，EZH2则增加。此外，沉默let-7b 会增加EZH2表达，提示其受let-7b调控。荧光素酶报告基因结果表明let-7b能与EZH2 mRNA 3’-UTR直接结合，抑制EZH2表达。免疫共沉淀结果表明KDM2B通过直接结合let-7b来抑制let-7b的表达。细胞功能实验表明，KDM2B沉默明显抑制卵巢癌细胞的增殖迁移，促进KDM2B的表达能增强卵巢癌细胞的活性；let-7b 上调能拮抗高KDM2B表达介导的促细胞增殖迁移效应；let-7b过表达能抑制卵巢癌细胞的增殖迁移。对裸鼠卵巢癌移植瘤模型检测发现KDM2B下调能够显著抑制卵巢癌肿瘤形成，let-7b下调则促进卵巢癌瘤体生长，.意义：本研究证实卵巢癌中存在KDM2B /let-7b/EZH2通路，该通路的激活可促进卵巢癌的发生发展，为临床治疗提供新的理论依据和治疗靶点。