脊神经节卫星细胞及Slit在神经元保护及再生中作用的研究

脊神经节中的卫星细胞（SGCs）与神经元间化学信息传递的模式及SGCs功能尚不清楚。申请者前期工作发现SGCs表达生长锥导向因子Slit1,而Slit能促进离体感觉神经元突起长出和延长。本项目拟用大鼠胚胎及成年坐骨神经损伤模型，用原位杂交、免疫荧光方法，明确内、外（损伤信号）因素对SGCs表达Slit1的影响；创建DRG神经元和SGCs分离培养技术，通过在DRG培养体系中保留或递除神经元，观察离体状况下感觉神经元对SGCs表达Slit1的影响；通过逆行示踪结合DRG免疫荧光标记技术，明确在体状况下感觉神经元对SGCs表达Slit1的影响。继而采用RNAi等技术，明确SGCs是否影响感觉神经元存活、突起生长，Slit1是否参与其中。通过上述研究，初步回答三个问题：（1）SGCs与神经元之间的化学信号传递模式；（2）SGCs对神经元是否具有保护作用；（3）SGCs表达Slit1的生理作用.

本项目利用BSA二次分层离心法分离DRG神经元与SGCs，通过免疫组织化学、WB、荧光金逆行示踪、miRNA微阵列芯片分析等方法，发现（1）药物可刺激在体SGCs增殖，SGCs数量增多有助于神经损伤的修复；（2）BSA二次分层离心法可成功建立单纯神经元培养、单纯SGCs培养及神经元与SGCs联合培养三个培养体系；（3）神经损伤后SGCs内Slit1的表达增强，于伤后7d达高峰；（4）神经元胞体的接触有助于SGCs表达Slit1蛋白；（5）坐骨神经损伤后DRG内23种miRNA表达发生显著变化，miRNA214广泛参与Slit-Robo通路，其靶基因为Slit-Robo下游信号分子srGAP3；（6）坐骨神经损伤后DRG内的srGAP3促进轴突再生。这些发现可能说明SGCs影响感觉神经元的存活、突起生长；Slit1参与其中。