扶正解毒化瘀方干预铜绿假单胞菌感染所致炎症“瀑布样效应”的机制研究

Choose the conditional pathogenic bacteria，pseudomonas aeruginosa(PA), the most common cause of pyaemia as the object of study. Inflammation injury of rats caused by infection of pseudomonas aeruginosa(PA) is used as experimental model. Fuzheng Jiedu Huayu Decoction, which has been proven as the effective drug therapy of senile pneumonia in National TCM Project Application in the 11th Five-Year Period, is selected as the drug intervention. The intervention point is the process of “pseudomonas aeruginosa(PA) infection, emerge of endotoxin lipopolysaccharide，excitation of TLR4-NF- kappa B signal transduction pathway，waterfall effect of inflammation，systemic inflammatory response syndrome (SIRS) and the resulting pyaemia”.Through the use of siRNA interference, flow cytometric bead array and laser confocal microscope,the mechanism of the treatment by Fuzheng Jiedu Huayu Decoction in inflammatory injury caused by LPS and in pneumonia caused by PA infection is revealed. And explore the treatment of pneumonia mechanism caused by multi-drug resistant bacteria by traditional Chinese medicine, and provide basis for further development of such medicines.

选择临床上最易引起脓毒血症的最常见的条件致病菌——铜绿假单胞菌（PA）为研究对象，以该菌感染所致大鼠炎症损伤为实验模型，选用"十一五"国家科技支撑计划项目验证治疗老年人肺炎疗效显著的扶正解毒化瘀方为干预药物，以铜绿假单胞菌感染后内毒素脂多糖激发TLR4-NF-κB信号传导通路引起炎症“瀑布样效应”，由此引发全身炎症反应综合征，进而导致脓毒血症这一关键环节为干预切入点，通过采用siRNA干扰、流式细胞微球阵列法、激光共聚焦显微镜等现代技术，阐明扶正解毒化瘀方干预LPS所致的炎症损伤的机制，从而揭示该方治疗PA感染所致肺炎的药效学机制，为进一步探索中药治疗多重耐药菌肺炎的药理学机制，并为进一步开发该类药物提供依据。

本研究通过体外实验和动物实验相结合，从不同角度观察了扶正解毒化瘀方的作用机制。体外实验部分，完成了扶正解毒化瘀方含药血清联合抗生素对PA及MDRPA的体外抑菌实验；观察了扶正解毒化瘀方对MDRPA外排泵的干预作用；通过激光共聚焦显微镜，较为直观地观察了扶正解毒化瘀方对MDRPA成熟生物膜的作用，结果提示我们，扶正解毒化瘀方对MDRPA生物膜的作用可能是该方对病程较长耐药菌感染患者临床有效性的作用基础。进行了沉默肺泡巨噬细胞TLR4基因的最佳小干扰RNA序列的筛选，并完成细胞实验，观察了扶正解毒化瘀方对TLR4/NF-κB通路的作用，针对扶正解毒化瘀方对集体免疫炎性损伤的调节作用从细胞层面进行了探索。. 在动物实验部分，分别建立MDRPA急性和慢性肺部感染大鼠的模型，观察扶正解毒化瘀方对模型大鼠的作用，并对其机制进行了一定的探索。从急性感染和慢性感染两个方面观察了MDRPA肺部感染所致机体免疫炎性反应，并观察了扶正解毒化瘀方对TNF-α、IL-6、IL-10等炎性细胞因子的调节作用。结果表明，扶正解毒化瘀方能够有效降低炎性细胞因子的水平。此外，对MDRPA急性和慢性肺部感染引起机体免疫炎性反应的TLR4/NF-κB通路进行研究，观察了扶正解毒化瘀方对TLR4/NF-κB通路的作用，结果表明扶正解毒化瘀方能够通过TLR4/NF-κB通路延缓MDRPA感染所致的机体免疫炎性损伤。以上结果初步阐明了扶正解毒化瘀方的作用机制，并且表明耐药菌感染所致的机体免疫风暴可能是中药的作用靶点之一，扶正解毒化瘀方对于临床反复的MDRPA慢性感染的治疗具有前景和优势。