miR-146a-5p及miR-328-3p在慢性乙型重型肝炎中的早期预警及作用机制研究

Acute-on-chronic liver failure (ACLF) induced by hepatitis B virus infection is a fatal event without effective treatment, therefore early warning signals and novel therapies are desperately needed. Our previous research has shown that serum miR-146a-5p and miR-328-3p are related with the development of HBV-related ACLF, yet the mechanism and significance remain unclear. This study aims to further confirm the involvement of miR-146a-5p and miR-328-3p in HBV-related ACLF by expanding sample size firstly, to explore the practicability of serum miR-146a-5p and/or miR-328-3p as early warning biomarkers. Secondly, we plan to investigate the regulation of cellular miR-146a-5p/miR-328-3p expression by HBV infection, and vice versa. At last, we would construct a liver cell specific Aptamer system and treat HBV-related ACLF model mice with miR-146a-5p/miR-328-3p agonist/antagonist, to examine the effect of the treatment in inflammatory factor secretion of liver cells and HBV-related ACLF development, therefore to elaborate the significance of miR-146a-5p/miR-328-3p as novel candidates for the early warning and treatment of HBV-related ACLF.

慢性乙肝病毒感染所致的重型肝炎危害严重，缺乏有效治疗方法，早期预警及探索新治疗方法至关重要。我们前期研究发现血清miR-146a-5p和miR-328-3p与慢乙肝重症化有相关性，但机制及意义尚不明确。本研究拟首先扩大样本量观察该相关性，探讨其作为早期预警指标的可行性；其次，从细胞水平研究HBV感染对miR-146a-5p/miR-328-3p表达的调控及miR-146a-5p/miR-328-3p对HBV复制以及肝细胞损伤的影响，用炎性因子列阵分析观察肝细胞炎症因子的变化；最后，构建肝细胞特异性Aptamer系统，在慢乙肝重症化模型小鼠体内投送miR-146a-5p/miR-328-3p激动/抑制剂，观察其对肝细胞炎性因子分泌的作用以及慢乙肝重症化的影响，从而阐明miR-146a-5p/miR-328-3p对慢乙肝重症化的早期预警、机制及潜在治疗作用，为其早期诊断和有效治疗提供新思路。

乙型肝炎是由乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）引起的一种常见的全球性传染病。据统计，全球范围内有约20亿人感染HBV, 每年约有100万人死于HBV相关终末期肝病。我国是HBV感染的重灾区，每年约有30万人死于HBV相关疾病，其中以肝衰竭最为严重。每年约有1%的乙型肝炎患者进展为肝功能衰竭。慢加肝功能衰竭(acute-on-chronic liver failure ，ACLF)是以慢性肝病为基础的急性肝失代偿的临床表现。ACLF的病理生理过程包括全身炎症反应综合征、炎症和氧化应激。可见，ACLF严重威胁着人类健康，其预后极差，死亡率较高。因此，有必要更好地了解HBV发病机制的分子机制。.最近的研究表明miRNAs在HBV的发病机制中发挥着重要作用。所以，本研究利用大量的样本量检测和验证了miR-146a-5P在慢性乙肝重症转归中的特异性变化，研究数据显示在慢性乙型肝炎和ACLF患者血清中miR-328-3p表达显著升高，并伴有较高的细胞促炎因子（TNF-α、IL-6、IL-8、IL-12和IL-18）；体外培养肝细胞系（THLE-2），研究HBV感染肝细胞对miR-146a-5p和miR-328-3p表达的影响及调控机制，研究数据显示HBV、HBc、和HBx的过表达显著增强了LPS诱导的细胞中miR-328-3p的表达以及成熟miR-146a-5p的表达；在研究miR-146a-5p和miR-328-3p对HBV DNA复制和病毒增殖的影响中发现转染pHBV1.3后，提高了HBV RNA和DNA的表达水平，而在抑制miR-328-3p和miR-146a-5p表达后显著降低了HBV RNA和DNA的表达水平。.在整个的研究结果中我们发现HBV通过STAT3信号通路促进miR-328-3p的表达，而miR-328-3p下调其靶点FOXO4，促进HBV感染的肝细胞THLE-2的损伤；在抑制METTL3的表达后可以改善HBV相关ACLF小鼠的肝损伤，有助于抑制miR-146a-5p的成熟。从这些结果中我们可以看出外周血中miR-328-3p表达的升高可能为临床早期诊断乙肝重症化提供新的分子诊断标志，从而达到对乙肝重症化的早期预警和提前干预，并揭示了引起乙肝重症化的具体分子机制，探究了改变miR-146a-5p和miR-328-3p的表达对乙肝重症化