融合SEAtm/CD80特异靶向性溶瘤HSV-1构建用于胶质瘤联合治疗

胶质瘤为中枢神经系统最常见的恶性肿瘤，而现有的方法治疗高级别胶质瘤后其中位生存期仅一年，迫切需要寻找新的治疗手段。溶瘤病毒为胶质瘤基因治疗研究的热点之一，而现有的溶瘤病毒往往溶瘤效率低、缺乏特异的胶质瘤靶向性，免疫激活能力差，故本项目拟采用HSVQuik技术通过将单拷贝的icp34.5基因重新融合到MGH1中,用端粒酶启动子hTERT和胶质瘤特异性增强子nestin作为icp34.5基因上游调控元件，以增强溶瘤效率和肿瘤靶向性，进一步将免疫治疗基因SEAtm/CD80与溶瘤病毒融合，得到具有免疫功能、胶质瘤特异靶向性溶瘤HSV-HN-SEAtm-CD80"武装载体"，实现胶质瘤的溶瘤和免疫双重功能联合治疗，为胶质瘤的综合生物治疗增添新手段。本项目能为HSV-1溶瘤病毒构建建立操作平台，构建的新型溶瘤HSV-1载体体系将具有安全、靶向、高效的特点，有望在胶质瘤的临床治疗中取得应用。

本项目针对现有溶瘤HSV-1存在的问题，在MGH1的基础上加入胶质瘤特异性增强子nestin和端粒酶启动子hTERT调控元件调控的icp34.5基因，进一步融合SEAtm/CD80免疫治疗基因，从而赋予该病毒具有特异的胶质瘤靶向治疗亲噬性、感染率高和增强机体抗肿瘤免疫作用的特点，发展了一种新型的、高效的、具有特异靶向性和免疫功能的溶瘤HSV-1载体，用于胶质瘤的联合治疗，为胶质瘤的综合生物治疗增添新手段。本研究主要获得以下成果：.1. 构建了携带hTERT和nestin调控元件操纵的icp34.5基因的溶瘤重组HSV-HN载体。.2. 获得了胶质瘤靶向溶瘤重组HSV-HN-SEAtm/CD80病毒。.3. 检测溶瘤重组HSV-HN-SEAtm/CD80在胶质瘤U251细胞中的表达情况。.4. 重组病毒HN-S-C在荷人裸鼠模型中的抗肿瘤作用。重组病毒主要在脑和肿瘤中表达，在其他脏器中无表达。重组病毒治疗剂HSV-HN-S-C治疗后，荷瘤小鼠的肿瘤体积明显小于其他对照组。用药第3天，血液中的病毒浓度最高，而粪便中的病毒浓度在第5天达到峰值，表明小鼠体内的病毒随着粪便不断排出体外，到第14天时，几乎检测不到病毒。.5. 重组溶瘤病毒HN-S-C抗肿瘤免疫反应的能力。重组溶瘤病毒HN-S-C组释放IFN-γ肿瘤特异性T细胞的数量显著高于其他对照组。重组溶瘤病毒HN-S-C组诱导CTL对肿瘤细胞的识别及杀伤效应显著高于其他对照组。