Ⅲ型前列腺炎患者前列腺液中纳米细菌矿化作用相关基因的鉴定

Ⅲ型前列腺炎在临床上极其常见，常伴有前列腺钙化或结石。纳米细菌是新发现的一种病原微生物。项目组已经证实纳米细菌与Ⅲ型前列腺炎发生、发展关系密切。该菌在生理性钙、磷浓不能浓度下，能形成羟磷灰石碳酸盐结晶，产生坚硬的矿化外壳。这既是该菌重要的生理特性，也是其致病的物质基础。但对其矿化作用的发生和基因调控均不了解。经过反复预试验，发现该菌培养上清中有一种主要蛋白，分子量约68KD，与磷蛋白分子量相近。而磷蛋白是诱导生物矿化的主要蛋白。据此推断，该分泌蛋白很可能是纳米菌产生矿化的物质基础。本研究拟重点对此蛋白进行质谱分析、N-端测序，然后通过同位素探针杂交等技术鉴定该蛋白的编码基因，构建目标基因的表达载体，转化大肠埃希菌进行表达，纯化出重组蛋白进行体外矿化作用研究，探讨纳米细菌矿化作用的关键基因，为深入认识该菌的矿化作用机制和致病机理奠定基础，并为Ⅲ型前列腺炎的诊治提供新的理论依据。

Ⅲ型前列腺炎在临床上极其常见，常伴有前列腺钙化或结石，病因复杂，诊治困难。纳米细菌是新发现的一种病原微生物。我们前期进行了CPPS患者的前列腺液和结石标本中纳米细菌的分离、培养和鉴定，证实纳米细菌的感染与Ⅲ型前列腺炎及前列腺结石的发生发展密切相关。该菌在生理性钙磷浓度下，能形成羟磷灰石磷酸盐结晶，产生坚硬的外壳。这既是该菌重要的生理特性，也是其致病的物质基础。但对其矿化作用的发生和基因调控均不了解。在本项目中，经过反复实险，应用双相电泳，在该菌的培养上清中发现一个分子量约68KD的差异蛋白，与磷蛋白分子量相近，而磷蛋白是诱导生物矿化的主要蛋白，据此推断，该分泌蛋白很可能是纳米细菌产生矿化的物质基础。重点针对这个蛋白，进行质谱分析发现同源蛋白，根据同源蛋白基因序列设计引物，提取纳米细菌DNA，进行PCR扩增，获得特异性的核酸片段，将该片段的核酸序列与NCBI数据库中的已知序列进行比对，结果未发现有相似结果，基因片段具备特异性，有在临床上可以用于纳米细菌致Ⅲ型前列腺炎的特异性基因诊断的价值。经验证，在正常人、Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ、Ⅳ型前列腺炎患者前列腺液标本中，用该片段的特异性PCR引物扩增，只有Ⅲ型前列腺炎标本可以扩增出特异性片段；在Ⅲ型前列腺炎中，敏感度９０%（27/30），特异度５３.３%（８/１５）,它敏感度高、方便、快速，具有快速诊断的临床应用价值。实验结果再次证明纳米细菌感染与Ⅲ型前列腺炎关系密切，该特异片段填补了纳米细菌快速特异性基因诊断的空白，为深入认识该菌的矿化作用机制和致病基理奠定基础。该核酸片段已申请并获得了国家发明专利1项，相关实验结果已发表SCI文章2篇，国内核心期刊2篇。