当归系列药对在新生化颗粒中配伍作用的物质基础与分子机制研究

Both the previous studies of our project team and the characteristics of clinical application of Chinese medicine indicated that herb pairs containing Angelica sinensis (Oliv.) Diels (Danggui) play significant roles in the formulae Xinshenghua Granules (XSHG). Undoubtedly, the study of herb pairs containing Danggui will help to reveal the compatibility rules of XSHG. Thus the researches below will be carried out: 1. Relevant evaluation methods of effects about XSHG will be conducted, including promoting blood circulation, nourishing the blood and relieving pain. Then the contribution of herb pairs containing Danggui to XSHG could be found by integrated strategy. 2. For the herb pairs that made a great contribution to XSHG, the impacts of this herb pair on XSHG will be performed based on the content variations of active ingredients in vitro and metabolic changes in vivo. 3. Metabolomics analysis will be applied to investigate the endogenous metabolic markers and pathway of XSHG, and the impacts of herb pairs containing Danggui on XSHG will be also conducted by this strategy. Additionally, network pharmacology will be used to build the interaction network of active ingredients–targets–pathway about the formulae XSHG. According to the results of metabolomics and network pharmacology, some certain shared pathway will be validated by molecular biology, thus clarifying the the compatibility rules and scientific connotation of XSHG. Furthermore, this study might provide a good reference for illustrating the drug interactions from the aspect of herb pair.

基于中医临床用药特点与项目组前期研究发现当归系列药对在新生化颗粒中具有重要作用。提出：药对是新生化颗粒配方中隐含的规律性特征。因此，拟开展工作如下：（1）建立适宜的养血活血与止痛效应评价方法，基于效应整合策略阐明当归系列药对针对新生化颗粒不同功效的作用贡献大小；（2）通过选择性缺失作用贡献较大的药对，研究其对新生化颗粒效应物质体外溶出与体内代谢变化的影响；（3）基于比较代谢组学揭示新生化颗粒和药对缺失后对效应相关的内源性代谢标志物及代谢通路的影响，采用网络药理学方法挖掘分析新生化颗粒主要效应成分的靶蛋白与通路网络，进一步选取代谢组学与网络药理学发现的共同作用通路进行分子生物学实验验证，从而明确新生化颗粒的作用通路，并阐明当归系列药对在全方中作用贡献的分子机制。最终揭示新生化颗粒的配伍规律与科学内涵，为以药对为切入点解析中医组方结构提供思路与方法。

本项目基于中医血虚和血瘀模型，采用撤药分析法比较评价了各当归系列药对在新生化颗粒中的养血、活血的贡献程度，研究发现不同的当归系列药对在新生化颗粒中的作用贡献程度不同，且当归-益母草药对在方中的养血活血贡献程度最大；通过比较评价单味药配伍前后以及缺失各当归系列药对前后主要效应成分含量变化的体外配伍成分比较分析也证实了药对的不同作用贡献的潜在效应物质基础；通过比较评价新生化颗粒中15个效应成分在正常和血虚模型大鼠体内的药代动力学行为的差异性研究，结果发现生物碱类成分和苯酞类成分是新生化颗粒发挥养血效应的重要活性成分；通过代谢组学和网络药理学基于新生化颗粒的养血作用，分别构建了内源性标记物的代谢通路和“成分-靶点-通路”的相互作用网络，研究发现新生化颗粒养血作用主要参与调节泛酸和辅酶A的生物合成、半胱氨酸和甲硫氨酸代谢、鞘脂类代谢等信号通路。新生化颗粒的治疗作用与改善血虚状态下血细胞功能以及调节肝脏物质和能量代谢有关，具体表现为增加血液中EPOR、F2等细胞因子的分泌，降低肝脏中HIF-1a、SPHK1等的表达，而提高肝脏中的ACSS1、AHCY等的水平而发挥养血作用。本研究为揭示新生化颗粒配伍作用与产品的进一步提升奠定了基础，为复杂方剂配伍规律研究提供了新的方法。.通过项目实施在国内外学术刊物发表论文10篇，其中SCI收录9篇；申请并获得国家发明专利2件；培养硕士研究生3名。项目成果转化应用产生显著经济社会效益，申请并获得2019年陕西高等学校科学技术奖一等奖和2020年度陕西省科学技术进步奖一等奖。