脂肪干细胞用于治疗颞下颌关节骨关节炎的实验研究

Object:to clarify the mechanism of the therapeutic effect TMJOA, the application of the law and the relevant cell molecules for the treatment of ASCs. Meaning:to accumulate scientific data of the treatment TMJOA with ASCs, to prepare basic research for ultimate clinical application of ASCs treatment TMJOA. Methods:Intends to use cell biology and molecular biology methods to induce differentiation of ASCs to complete isolation, cultivation and identification, as seed cells in vivo and vitro experiments. To establish the animal models of TMJOA, ASCs with different concentrations were injected in the joint damage, to evaluate the therapeutic effect of ASCs on TMJOA by means of imaging, molecular biology, histology, histomorphometry, biomechanics, etc. Different concentrations of ASCs and chondrocytes were cultured together in vitro, and using the methods of biology and molecular biology to evaluate the impact of ASCs to condylar cartilage cells ,simultaneously to detect changes in cells secrete factors expression. To establish BMSCs treatment as the positive control groups, saline treatment as the negative control groups, and Health TMJ as the blank control groups. To apply the SPSS13.0 software for statistical analysis. Expected Results:to elucidate the pathogenesis of osteoarthritis of the temporomandibular joint, and provide the scientific basis for the use of experimental fat stem cell treatment of temporomandibular joint osteoarthritis.

目的：阐明ASCs用于治疗TMJOA的治疗效果、应用规律及相关细胞分子的作用机制。意义：为ASCs用于治疗TMJOA积累科学的数据,为ASCs治疗TMJOA的最终临床应用作好基础研究工作。方法：拟采用细胞生物学和分子生物学诱导分化的方法完成ASCs分离、培养和鉴定，作为体内外实验的种子细胞；建立TMJOA的动物模型，应用不同浓度的ASCs注射于损伤的关节内，并通过影像学、分子生物学、组织学、组织形态计量学、生物力学等手段评价ASCs对TMJOA的治疗效果；体外培养髁突的软骨细胞，应用不同浓度的ASCs进行联合培养，应用细胞生物学和分子生物学方法评价ASCs对髁突软骨细胞生物学行为的影响及细胞旁分泌因子表达的变化；设立BMSCs治疗的阳性对照组，生理盐水治疗的阴性对照组和健康TMJ的空白对照组；实验所得数据应用SPSS13.0软件进行统计学分析。预期结果：阐明颞下颌关节骨关节炎的发病机理，并为利用脂肪干细胞矫治颞下颌关节骨关节炎提供科学的实验依据。

目的：探讨颞下颌关节骨关节病中软骨下骨的改建及机制，探讨脂肪干细胞用于治疗颞下颌关节骨关节病的可能性。.方法：采用关节腔注射胶原酶法建立颞下颌关节骨关节的动物模型，按胶原酶注射后的时间分组。制作颞下颌关节组织学标本，做组织病理学染色、相关蛋白的免疫组织化学检测、软骨下骨中干细胞相关蛋白的Western blot分析。通过Image-Pro Plus图像分析软件定量检测相关蛋白在软骨下骨的表达变化，使用SPSS软件对检测结果进行统计学分析。自动物体内获取脂肪组织，分离、培养和鉴定ASCs。用手术损伤关节盘的方法建立TMJOA的动物模型，再应用ASCs做关节腔内注射，组织学观察疗效。.结果：组织学染色：实验组软骨纤维层连续性破坏，软骨层次紊乱，骨软骨交界不清晰，出现OA样变化，软骨下骨骨小梁形态和密度均出现明显改变，在软骨下骨区内出现了软骨样化生。相关蛋白的免疫组织化学染色：在OA早期（2周时），CD44和MMP-9蛋白的表达明显升高(P<0.01)，随时间增加表达强度逐渐减弱；在OA的疾病过程中，Sox-9和Col Ⅱ蛋白的表达均有升高，组间差异不明显。软骨下骨中干细胞相关蛋白表达的Western blot分析：各实验组中，CD44和Sox-9蛋白含量均明显增加，随时间延长CD44蛋白含量呈逐渐下降趋势，Sox-9表达比较平稳。统计学分析： 实验组中Col Ⅱ、MMP-9、CD44和Sox-9蛋白表达与正常对照组比较均有明显升高（P<0.05）；实验组中软骨下骨CD44和Sox-9蛋白表达明显升高（P<0.05），CD44 蛋白表达各组间差异明显（P<0.05），在OA早期（2周时）CD44 蛋白表达显著增加（P<0.01）。成功分离、培养和鉴定了脂肪干细胞。.结论： .1.关节腔内注射胶原酶和手术损伤关节盘的方法建立稳定、可重复的TMJOA动物疾病模型。.2.在TMJOA的进程中，软骨下骨对关节软骨的早期修复起了重要的作用。.3．在TMJOA的进程中，软骨下骨的内源性干细胞或前体细胞对骨组织改建和软骨损伤的修复起了重要的作用。.4. ASCs具有多向分化的潜能，关节腔内注射ASCs对TMJOA疗效明显，ASCs可以成为TMJOA修复的种子细胞。