绵马贯众间苯三酚类化合物黄绵马酸AB抑制A型流感病毒复制的分子机制研究

The rhizome of Dryopteris crassirhizoma Nakai (Dryopteridaceae) is recorded in each edition of Chinese pharmacopoeia and has been used for treating influenza virus infection clinically. It has been reported that the extract of D. crassirhizoma could significantly inhibit influenza virus and the phloroglucinol is the main component in the extract that has the antiviral activities. However, how phloroglucinol contents inhibit influenza virus hasn’t been investigated until now. We previously showed that Flavaspidic acid AB (FA-AB) inhibited porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) by targeting multiple-steps in PRRSV replication cycle. We also found that FA-AB potently supressed the 2009 pandemic H1N1 virus replication. In this proposal, we will investigate the mechanisms by that FA-AB inhibits influenza virus replication to determine the effects of FA-AB on virus attachment, internalization, fusion and uncoating, vRNP migration, virus RNA systhesis, and viral particles release. We will also study whether FA-AB can inhibit the activity of influenza virus neuraminidase, hemagglutinin, and its RNA polymerase, and analyze the effects of FA-AB on virus dependent celluar signaling pathways. This work may help us understand how FA-AB hibibits influenza virus replication and provide some insights into the development of new therapeutic agents to control influenza virus infection.

绵马贯众为鳞毛蕨科植物粗茎鳞毛蕨（Dryopteris crassirhizoma Nakal）的干燥根茎和叶柄残基，在临床上用于防治流感。研究表明绵马贯众间苯三酚类化合物对流感病毒具有强烈抑制效果，但是，人们尚不清楚间苯三酚类化合物抑制流感病毒的机制。我们前期研究发现绵马贯众间苯三酚类化合物黄绵马酸AB能够多靶点的抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒，同时发现其对2009年H1N1大流行流感病毒（H1N1/09）也具有显著的抑制活性。因此，在本项目，我们将系统研究黄绵马酸AB抑制流感病毒复制周期的节点，确定其对病毒吸附、进入细胞、膜融合与脱衣壳、vRNP转运、病毒RNA合成及新的病毒颗粒释放等过程的抑制效果；研究其对病毒神经氨酸酶、血凝素和RNA聚合酶活性的作用；分析黄绵马酸AB对病毒复制依赖的细胞内信号通路的影响，以确定其作用的关键靶位点和机制，为进一步利用绵马贯众的抗流感病毒活性提供数据支持。

绵马贯众为鳞毛蕨科植物粗茎鳞毛蕨（Dryopteris crassirhizoma Nakal）的干燥根茎和叶柄残基，在临床上用于防治流感。研究表明绵马贯众间苯三酚类化合物对流感病毒具有强烈抑制效果，但是，人们尚不清楚间苯三酚类化合物抑制流感病毒的机制。在本项目，我们系统研究了间苯三酚类化合物黄绵马酸AB（Flavaspidic acid AB, FA-AB）抑制流感病毒复制的活性及其作用机制。我们的研究发现，FA-AB在不同细胞上抑制多种流感病毒毒株复制，包括流感病毒鼠肺适应株（WSN）、季节性流感病毒（H3N2）、大流行甲流毒株（H1N1）及重要的禽流感毒株（H9N2）。FA-AB在40 μM浓度时，可完全抑制WSN和H9N2毒株在A549细胞中的复制，PR8和H3N2的病毒产量也下降了大约100倍，并且FA-AB对病毒复制的抑制作用呈现剂量依赖性。机制研究发现，FA-AB对病毒感染活性没有直接影响，不影响病毒在细胞表面的吸附，但是可显著阻滞病毒进入细胞。进一步研究揭示，FA-AB主要是通过抑制受体酪氨酸激酶诱导的信号转导来发挥抑制病毒进入细胞的作用。本项目为进一步开发利用FA-AB的抗病毒活性打下了坚实的基础。