感染RSV的气道上皮细胞对树突状细胞基因表达的影响及其在哮喘发病中的作用

呼吸道合胞病毒(RSV)是引起哮喘特别是婴幼儿哮喘的重要原因，但是确切机制尚未阐明。树突状细胞DC是哮喘发病的始动环节，但是在下呼吸道RSV不会直接接触DC。RSV感染的靶细胞是气道上皮细胞(AECs)。本课题组首次发现RSV感染的AECs能够激活DC。在前期研究中，我们发现大鼠DCs与RSV感染的大鼠AECs共培养后出现功能性成熟，包括OX40L、TARC、MHCII和CD86的表达增高，大鼠DCsT细胞增殖的能力增强。我们推测，受到激活的DCs可促进CD4+T细胞的TH2分化，这可能是RSV感染诱发哮喘的一个重要机制。为证实这一假说，我们将复制AECs与DCs共培养模型，采用基因芯片、流式细胞仪等技术，从整体-细胞2个层次，观察mDCs基因表达的改变对CD4+T细胞的影响及其信号传导通路。本课题将从新的视觉阐明RSV感染诱发哮喘的分子和免疫机制，并为哮喘的防治提供新靶点。

在现有研究成果的基础上，我们研究RSV感染的人类气道上皮细胞（RSV-HAECs）对人类树突状细胞成熟和功能的影响。进一步研究受到RSV-HAECs影响而激活的人类mDCs对CD4+ T细胞的作用。建立大鼠感染RSV后诱发哮喘的模型，通过淫羊藿治疗降低CRTH2来缓解哮喘症状。使用基因芯片对RSV-HAECs激活的人类mDCs进行分析，研究基因表达。侧重于可能促进CD4+T细胞向TH2分化的各种信号通路的细胞因子，观察其表达的改变。对基因芯片发现表达发生改变的且可能促进CD4+T细胞向TH2分化的细胞因子（即筛选出的细胞因子）进行进一步反向研究。分离并且培养大鼠骨髓来源的mDCs。以上筛选出的细胞因子，分别对表达增高的细胞因子加以抑制（siRNA转染mDCs），而对表达降低的细胞因子则通过构建质粒载体进行瞬时基因转染mDCs使目标基因表达增强。随后将经过以上处理的mDCs经大鼠尾静脉注入哮喘大鼠模型，如能使哮喘减轻则可反证所筛选出的阳性细胞因子是mDCs表达的与感染RSV后诱发哮喘相关的关键细胞因子。我们按照课题的研究计划，逐步深入实验，并取得了一定的成果。.我们证实呼吸道合胞病毒感染后树突状细胞表达CD86增强。呼吸道合胞病毒诱发加重哮喘的过程中，CD86或许有重要的作用。在本研究中，我们发现过表达的lncRNA-n337374对哮喘有效。哮喘小鼠感染了过表达lncRNA-n337374的慢病毒后，哮喘症状缓解。lncRNA-n337374或许能成为哮喘治疗的一个靶点。