基于络风内动病机学说的络衡方对ox-LDL介导的人树突状细胞免疫成熟过程中IL-27/JAK-STATs信号通路的影响

According to the actuality of having not been completely clarified mechanism of AS and lacking of the effect a permanent cure，we condensed the theory of "Stirring of endogenous collateral wind" which based on the changeable characters of coronary heart disease. Focus on this theory, we made paeonol and pseudo-ginseng saponins which come from cynanchum paniculatum and pseudo-ginseng into a new drug named Luoheng recipe. On the basis of previous study, we select peripheral blood in patients with CHD for the specimens, aiming at exploring the effect of Luoheng recipe regulating immune maturation of human dendritic cell induced by ox-LDL. At the same time, we use the DC induced by ox-LDL as our study model, finding out the optimum concentration of Luoheng recipe. In order to prove that Luoheng recipe can regulate the IL-27/JAK-STATs signaling pathway, we will observe the changes of related protein content before and after the Luoheng recipe intervention, pinpointing a more accurate pathway of drug action linked to IL-27. Define the validity and molecular mechanism of Luoheng recipe, thereby providing new ideas for the prevention and treatment of atherosclerotic disease with traditional Chinese medicine.

针对目前动脉粥样硬化发病机制尚未完全阐明、治疗缺乏治本之策等现状，我们根据冠状动脉粥样硬化性心脏病(CHD)发病急骤、临床表现变化多端等特点，提出络风内动病机理论，并根据《太平圣惠方》"治恶疰心痛，闷绝欲死：鬼督邮一两、安息香一两做丸"的记载，选择徐长卿、三七和冰片组成络衡方。在既往研究基础上，观察络衡方在调节ox-LDL介导的树突状细胞（DC）免疫成熟过程中的作用，探索出络衡方作用于DC的最佳浓度，同时观察络衡方干预DC前后相关蛋白的变化，研究络衡方对IL-27/JAK-STATs信号通路的影响，从而揭示络衡方抑制免疫反应、防治动脉粥样硬化的有效性及分子机制，为中医药防治动脉粥样硬化性疾病提供新的思路。

针对目前动脉粥样硬化（AS）发病机制尚未完全阐明、缺乏治本之策的现状开展本项研究。动脉粥样硬化斑块形成包含免疫反应的过程，ox-LDL诱发的天然免疫和获得性免疫在AS的发生发展过程中均起到重要作用。树突状细胞（DC）是参与AS免疫反应的主要细胞之一，IL-27可由活化的DC产生，并可通过激活STAT1/STAT3途径诱导T细胞分化，促进AS的免疫反应进程，进而促使AS的发生、发展及斑块破裂。.王显教授经过长期实践和研究，提出动脉粥样硬化“络风内动”学说，选择徐长卿、地龙、三七等药物组成络衡方。本实验通过AS免疫反应中的重要特异性抗原ox-LDL来诱导DC成熟，观察络衡方是否能通过对IL-27/JAK-STATs信号通路的调控来实现对DC成熟过程的调节，进而实现对AS免疫过程的调节。.本实验选择冠状动脉造影证实的冠心病患者外周血作为标本，将人PBMC来源的DC作为实验模型，以ox-LDL作为抗原诱导DC成熟。用不同浓度的络衡方含药血清对该过程进行干预，观察DC的形态变化，检测DC表面CD分子的表达，检测ox-LDL受体、IL-27受体及IL-27/JAK-STATs信号通路相关蛋白的表达及与之对应的基因表达。.实验结果显示：ox-LDL可以促进DC体积增大，表面毛刺状凸起增多，促进表面CD1a、CD80、CD83、CD86等分子的高表达，上调IL-27的分泌，促进DC的免疫成熟过程。络衡方含药血清干预DC的免疫成熟过程，可以使DC表面毛刺状凸起减少，减弱DC表面CD1a、CD80、CD83、CD86等分子的表达，降低IL-27、JAK1、JAK2、STAT1、STAT3、LOX1、CD36、IL-RA、GP130等基因的表达，减少IL-27的分泌，降低JAK1、JAK2、STAT1、STAT3、LOX1、CD36等蛋白的表达。以上研究表明，络衡方可以通过IL-27/JAK-STATs信号通路进行调控，达到抑制DC的免疫成熟、调节AS免疫过程，防治AS的目的。.本实验初步阐明了络衡方防治动脉粥样硬化的分子机制，进一步佐证了“络风内动”病机学说，为络衡方的临床应用和推广奠定了基础，为中医药防治动脉粥样硬化性疾病提供新的思路。