D1蛋白酶的晶体结构及其抑制剂先导化合物的筛选

D1蛋白酶是近年来发现的可作为除草剂研究的新作用靶标。本项目的研究采用基因工程方法从菠菜中克隆D1蛋白酶的基因，构建该蛋白酶的重组表达质粒和工程菌，优化表达条件，探索最佳的分离纯化条件，得到稳定来源的酶蛋白。借用生物学手段，从蛋白质结构-功能角度出发，将D1蛋白酶活性大小与其特定构象相关联，制备D1蛋白酶特异性的单克隆抗体作为结构探针，建立抑制剂先导化合物快速和高通量的筛选方法。采用表面等离子体共振(SPR)分析技术研究先导化合物对D1蛋白酶与抗体探针之间分子识别的影响规律，定性和定量地检测先导化合物对D1蛋白酶的抑制活性大小，对先导化合物进行筛选.同时采用结构生物学方法测定酶蛋白的晶体结构，对先导化合物的结构优化和合理设计进行指导。通过该项目的实施，能够加速开发新型D1蛋白酶抑制剂的研究进程，通过后续的进一步工作后可望获得1-2种新型的、具有潜在价值的D1蛋白酶抑制剂。