冠心病血瘀证相关microRNA组学分析及靶基因调控网络研究

冠心病（CHD）是多因素、多基因、多通路的复杂疾病，血瘀证是CHD最常见的证型之一，其发病机理涉及不同层次生物网络调控。新近研究表明，microRNA是心血管疾病最重要的调控因子之一，其表达量增加或减少均能引发严重的病理后果。活血化瘀方药可能是通过恢复相关miRNA与靶基因之间的消长平衡，调节机体阴阳失衡，保持机体内环境动态平衡来治疗冠心病血瘀证。本研究拟选择临床经冠脉造影确诊的冠心病血瘀证典型病例，利用微流体microRNA表达谱芯片、cDNA芯片、生物信息学分析和qRT-PCR、western blot等技术，筛选并验证冠心病血瘀证相关miRNA及其靶基因，绘制冠心病血瘀证相关microRNA与靶基因的调控网络，同时用活血化瘀代表方药血府逐瘀胶囊进行干预，阐述冠心病血瘀证病证结合、方证相应理论的科学内涵，为研制治疗冠心病血瘀证的有效方药提供新的靶标。

目的：本研究选择临床经冠脉造影确诊的冠心病血瘀证典型病例，筛选并验证冠心病血瘀证相关miRNA及其靶基因，绘制冠心病血瘀证相关microRNA与靶基因的调控网络。通过筛选并验证冠心病血瘀证相关miRNA及其靶基因，绘制冠心病血瘀证相关microRNA与靶基因的调控网络，寻找冠心病血瘀证的生物标志物，为有效方药的研究提供新的靶标，阐述冠心病血瘀证病证结合、方证相应理论的科学内涵。通过用活血化瘀代表药物三七的提取物为主要成分的血塞通胶囊进行干预，用“以药测证”的方法对生物标志物进行验证，从miRNA表达调控角度探讨并阐释血塞通的表观遗传学作用机制，为中医药治疗冠心病的机制研究提供新思路。. 方法：入选80例观察样本，包括20例正常人，20例冠心病血瘀证，20例冠心病非血瘀证，20例非冠心病血瘀证。利用微流体microRNA表达谱芯片、cDNA芯片、生物信息学分析等技术，筛选出冠心病血瘀证特异表达的标志物。入选冠心病不稳定性心绞痛血瘀证患者80例，采用随机、双盲的研究方法，用活血化瘀药物进行干预治疗，收集治疗前、治疗后2周、治疗后4周的症状、中医证候、实验室指标。在体外利用人脐静脉内皮细胞（HUVEC）构建氧化损伤模型，采用RNA干扰、流式细胞仪定量分析、real-time RT PCR、western blot等技术，将hsa-miR-199a-5p、hsa-miR-146b-5p mimic转染至模型细胞，并利用血塞通进行干预。. 结论：1、miR-146b-5p、miR-199a-5p、CALR 和 TP53 可以作为不稳定性心绞痛血瘀证患者的生物标志物。从microRNA及其靶基因表达层面分析“异病同证”由于其病变部位的不同。2、血塞通胶囊有改善患者症状，证候积分及指标的作用。hsa-miR-199a-5p和hsa-miR-146b-5p可能是血塞通治疗冠心病血瘀证的调控靶点，可以推测KIR3DS1、TP53、SESN2、PRF1可能是hsa-miR-199a-5p和hsa-miR-146b-5p的靶基因。3、血塞通可以有效降低hsa-miR-146b-5p的表达。hsa-miR-199a-5p和hsa-miR-146b-5p可能通过作用于抗原呈递和处理通路、p53信号通路和NK细胞介导的细毒性通路从而干预冠心病血瘀证的分子机制。