维医异常黏液质型卵巢早衰病证大鼠模型建立及其生殖生物学基础比较研究

Premature ovarian failure (POF) is a common woman's endocrinal disease. There is an upward trend in incidence and significant efficacy in gynecology of traditional Uighur medicine. The detection rate of POF in abnormal balgham syndrome is highest in Uighur medicine clinical diagnosis and treatment, but its basic research of reproductive biology has not been reported yet, so it limitise its treatment of standardization and modernization.The research team as Uighur humoural theory if a breakthrough point, to follow model of syndrome characterization as modeling principle,based on the established balgham rat model ,to develop a POF rat model of abnormal balgham and to evaluate systematically. To study reproductive biological charecteristics and ovarian function systematically by compareing it with western medicine ：Cisplatin induced POF model and cisplatin induced POF model of abnormal balgham and to futher assassement by natural cross-check with traditional Uighur characteristic medicine balgham muniziq .To discuss innate related mechanisms between formation of abnormal balgham POF with gonadal axis neuroendocrine regulation network and with POF related signal transduction pathway function via comparative analysis of series parameters including morphology of gonadal axis, neuroendocrine related hormones,structure of ovarian tissues by collecting gonadal axis and ovarian tissues and peripheral blood ,to reveal its essence and to provide a reliable experimental animal model of the disease for experimental study,Uighur pharmaprojects and for Uighur drug evaluation.

卵巢早衰是妇科内分泌领域的常见病。发病率有上升趋势。在维医妇科疗效显著。在维医临床辨证诊疗中，异常黏液质型卵巢早衰检出率最高，但是其生殖生物学基础研究未见报道，限制着其治疗的标准化和现代化。项目组以维医体液论为切入点，以证候表征模型原则，在已建立的异常黏液质型大鼠模型基础上，造异常黏液质型卵巢早衰病证大鼠模型并系统评价，通过与西药顺氯氨铂诱导卵巢早衰模型以及西药顺氯氨铂诱导异常黏液质型卵巢早衰大鼠模型做比较对其生殖生物学特征、卵巢功能进行系统研究，并以特色药粘液质型复方木尼孜其颗粒自然对证和反证后加以评估；收集性腺轴和卵巢组织及外周血，通过性腺轴形态、神经内分泌相关激素、卵巢组织结构等一系列指标的比较分析，研究异常黏液质型卵巢早衰病证的形成与性腺轴神经内分泌调控网络及卵巢早衰相关信号转导通路功能改变的内在联系机制，揭示其本质，为该病证的实验研究、维药研发和维药物评价提供可靠的实验动物模型。

本慢性应激卵巢早衰大鼠模型的生殖生物学基础以及中药木尼孜其白尕木合剂对其的作用机制尚不明确。本课题以慢性应急理论为切入点，建立并系统评价慢性应激型卵巢早衰大鼠模型生殖生物学特征及卵巢功能，与西药顺氯氨铂诱导的卵巢早衰模（POF）型比较，同时以木尼孜其白尕木合剂干涉并加以评估。主要内容为1）建立慢性应激型POF大鼠模型（简称为模型）并与西药顺铂诱导的POF模型比较，发现慢性应激与顺铂化疗均可导致POF，其中前者更稳定。该模型下丘脑-垂体-卵巢轴形态学的改变，为治疗POF的研究提供形态学依据。该模型药物剂量的确定研究中，造模大鼠分为9组，即正常组，POF组，应激组，POF药物干预组（高、中、低剂量），应激药物干预组（高、中、低剂量）。通过生物学基础、组织病理学、生殖激素水平、蛋白表达水平来确定高剂量是作用效果最为显著的；2）比较模型用药前后的生物学基础，采用ELISA法检测生殖激素水平（E2、FSH、LH、P、PRL、INHB、AMH）发现模型中性激素水平都下降符合POF标准，而给药后都上升；收集血浆，卵巢，下丘脑，垂体等进行组织病理学研究、HE染色，光镜观察其下丘脑、垂体、卵巢组织形态学变化，通过电镜观察卵巢组织超微结构，免疫组化检测 SRB1、CYP2E1、 CYP51、C3及VEGF等蛋白表达量；采用UPLC-MS/MS检测血浆中DA、5-HT、EP等神经递质含量，通过HE，MASSON等特染处理卵巢、下丘脑、垂体等组织，观察性腺轴的病理学变化，发现长期处于应激状态能够导致POF；其性腺轴的组织病理学改变，卵巢储备功能的下降以及出现的内分泌紊乱可能是其发病的重要机制之一；木尼孜其百尕木合剂能够在一定程度上改善POF病变，其药理作用机制可能与调整内分泌紊乱及对性腺轴病理学改变的修复作用有关。3）模型的血清蛋白质组学相关研究发现靶蛋白PFN1和CFL1并对其进行RT-PCR验证。本研究结果显示慢性应激能导致POF。木尼孜其白尕木合剂不仅能改善生殖激素水平紊乱，还能改善下丘脑-垂体-卵巢轴的功能，其机制可能是改变血清中以上激素水平，降低卵巢早衰相关蛋白PFN-1的表达，其CFL1作用待研究。