PIK3CA,PIK3CB双重抑制联合利妥昔单抗在DLBCL靶向治疗中的作用及机制研究

Diffuse Large B Cell Lymphoma (DLBCL) is most frequent malignancy in hemotopoietic lymph system, which is characterized by strong invasion and poor prognosis. DLBCL has greater heterogeneity in clinical manifestation as well as histological morphology whose first–line clinical treatment is R-CHOP approach. It was however found that R-CHOP therapy was not necessarily effective to all patients with DLBCL. In our previous study, we found that there existed copying number variation (CNV) in PIK3CA and PIK3CB, two catalytic subunits of PI3K and there were significant association between CNV of PIK3CA and PIK3CB and poorer prognosis, suggesting that both PIK3CA and PIK3CB may play an important role in the carcinogenesis of DLBCL. However, the relevant role and underlying mechanism remain elusive. In our present study, we propose that dual inhibition of PIK3CA and PIK3CB in combination of Rituximab could effectively suppress therapy the DLBCL. Therefore, to support the proposal with evidence, we are going to statistically analyze the correlation between CNV of PIK3CA/B and therapeutic effect; and to observe the potential therapy of dual inhition of PIK3CA/B using BYL719 and TGX-221, specific inhibitor of PIK3CA and PIK3CB respectively, in combination with Rituximab, a well-used clinical injection on the xenograft mouse model of DLBCL; and to establish the transgenic DLBCL cell lines whose PIK3CA/B was ectopically expressed (stably knockdown or over-expression). With those cell model, we are going to observe the interaction between PIK3CA and PIK3CB, and molecular changes of downstream targets of PIKCA/B.

弥漫大B细胞淋巴瘤（Diffuse Large B Cell Lymphoma, DLBCL）是最常见的淋巴造血系统恶性肿瘤，其侵袭性强、预后差且异质性高。R-CHOP是其临床一线治疗方案，但发现其对部分个体治疗效果不佳。我们前期发现，DLBCL中PIK3CA，PIK3CB存在基因拷贝数变异且与预后差有统计学相关性，提示PIK3CA/B的基因拷贝数变异在DLBCL治疗中起着重要作用，但其作用及机制未知。本研究拟分析DLBCL患者中PIK3CA/B的拷贝数变异与治疗效果的相关性；拟运用PIK3CA抑制剂BYL719及PIK3CB抑制剂TGX-221联合利妥昔单抗在体外DLBCL细胞系水平及体内裸鼠皮下荷瘤实验，观察双重抑制PIK3CA,PIK3CB在靶向治疗DLBCL中的作用；以阐明其在DLBCL治疗中的作用及相关机制，最终为DLBCL的新疗法提供理论依据。

弥漫大B细胞淋巴瘤（Diffuse Large B Cell Lymphoma, DLBCL）是最常见的淋巴造血系统恶性肿瘤，其侵袭性强、预后差且异质性高。R-CHOP是其临床一线治疗方案，但发现其对部分个体治疗效果不佳。为研究PIK3CA在DLBCL中的抑制效果和作用，我们从PIK3CA的基因状态，蛋白表达和体外细胞实验进行研究。.我们采用荧光原位杂交技术（FISH）对DLBCL FFPE样本组织中的PIK3CA和PTEN基因改变进行了检测。发现PIK3CA扩增率和PTEN丢失率分别为12.7％（26/205）和12.2％（25/205）。PIK3CA扩增和PTEN的丢失与临床病理学参数之间没有显著相关性，与生存预后之间没有显著相关性。PIK3CA扩增与PTEN丢失之间也没有显著的相关性。我们的研究结果表明PIK3CA扩增和PTEN缺失在DNA水平上是DLBCL发病机制中的重要事件。 .在DLBCL组织芯片中检测p110α表达发现，在RH中生发中心内外均可见散在分布的阳性表达的淋巴细胞，在DLBCL中呈不同程度的弥漫阳性表达。阳性表达率分别是80%，强阳性表达率是26.7%。p110α的强阳性表达与生存期无显著相关性（P=0.212）。pAKT中强阳性组病例的预后较差，经过Log-rank检测，两组间未显示显著性差异（P=0.165）。PIK3CA蛋白的异常表达与临床预后密切相关，可以作为监测临床预后的指标。p110α的强阳性表达与pAKT的表达密切相关，提示可能在AKT的活化中起重要作用。.我们利用RNAi技术，以慢病毒为载体，用含有PIK3CA干扰序列的慢病毒和对照空病毒分别感染LY1/LY8细胞，检测细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡及相关蛋白的表达情况。其中PIK3CA与对照组相比发生了明显的G0/G1期阻滞，有显著性差异（P＜0.05）。干扰之后实验组早期凋亡发生率为11.5(10.30±1.11)%，对照组为5.7(5.13±0.38)%，发生了明显的早期凋亡（P＜0.05）。生长曲线显示干扰后细胞增殖明显减低，与对照组相比72和96小时增殖具有显著差异。干扰PIK3CA催化亚单位的表达可以导致pAKT活性下降，并可以导致周期阻滞和细胞凋亡，能够有效抑制DLBCL细胞的增殖，可能有利于选择性抑制剂发挥其抑制肿瘤生长的效应，成为DLBCL靶向治疗的策略之一。