生脉方对CYP3A4酶不同结合位点的差异影响及其机理研究

中药多组分可能同时作用于CYP酶的不同结合位点，对其相对应的代谢通路产生选择性影响，最终对该酶介导的体内代谢发挥整体调控作用。关于中药复杂组分对CYP3A4酶不同结合位点的差异影响及其机理研究目前尚无他人涉足。本课题拟在前期研究基础上，以生脉方为研究对象，以CYP3A4的探针药物咪达唑仑为研究载体，从CYP酶结合位点着手：（1）通过非经典酶动力学模型构建与酶-底物交互作用分析，探讨生脉方对咪达唑仑1′-羟化与4-羟化不同代谢通路的差异影响及其机制；（2）采用将生脉方拆方、组方及色谱逐级分离等多种技术手段，探寻生脉方中对咪达唑仑不同羟化代谢通路产生差异影响的效应部位及其成分；（3）将阳性结果成分组合还原与生脉方整体效应进行比较，建立生脉方多组分与酶多结合位点相关模型，揭示生脉方复杂组分基于酶结合位点的配伍机理及其相互作用机制。为促进中药现代化，探索中药方剂的配伍规律与机制提供新的研究思路。

中药多组分可能同时作用于CYP酶的不同结合位点，对其相对应的代谢通路产生选择性影响，最终对该酶介导的体内代谢发挥整体调控作用。课题以生脉方-参麦注射液为研究对象，以CYP3A4的探针药物咪达唑仑为研究载体证实：参麦注射液对咪达唑仑的不同羟化代谢通路表现出差异影响，即抑制其4-羟化代谢，而激活其1′-羟化代谢，最终对CYP3A4介导的咪达唑仑的体内代谢产生综合调控作用。在此基础上我们通过固相萃取分离、色谱逐级分离结合体外代谢及波谱分析技术（氢谱、碳谱、LC-MS/MS）、色谱行为比对技术探寻和确证了参麦注射液中对CYP3A4介导的咪达唑仑不同羟化代谢通路产生差异影响的阳性成分为人参炔三醇（PXT）；且进一步通过与参麦注射液整体效应比对，结合肝微粒体体外活性研究，确认了人参炔三醇对CYP3A介导的MDZ羟化代谢差异影响，从酶动力学角度深入探讨了差异影响的内在机制。为探讨中药复杂组分对CYP酶不同结合位点的差异影响及其机理研究提供了科学依据和研究思路。