口服耐受对炎症性肠病中肠粘膜γδ T细胞作用的影响及机制研究

Since the incidence of inflammatory bowel diseases (IBD) has being risen in recent years, the pathogenesis and treatment is always the hot topic of research. γδ T cells constitute an important subset in the intestinal mucosal immune system and have close relationship with oral tolerance. However, the role of γδ T cells in IBD patients and animal models is still controversial. Our previous study found that the protective effect of oral tolerance on dextran sulfate sodium (DSS) induced colitis is associated with an increase in γδ T cells in large intestinal mucosa. Small intestinal intraepithelial γδ T cells play a protective role in DSS-induced colitis. Oral tolerance strengthens the suppressive function of the γδ T cells. But the exact mechanism is not clear. The project is to assess the role of intestinal mucosal γδ T cells in 2, 4, 6-trinitrobenesulfonic acid (TNBS) induced colitis by cell transferring technology and then investigate the qualitative and quantitative changes of intestinal mucosal γδ T cells in oral tolerance treated mice. To explore the mechanism of γδ T cells exerting their roles, the expressions of cytokines, growth factors, cell recognition molecules, homing molecules and the proliferation of CD4+ T cells by co-culturing are detected. The series of studies will help the better understanding of the pathogenesis of IBD and the mechanism of oral tolerance and provide a theoretical basis for oral tolerance and γδ T cell-targeted intervention as the treatment of inflammatory bowel diseases.

炎症性肠病（IBD）的发病率不断提高，其发病机制及治疗一直是研究热点。γδ T细胞是肠粘膜免疫系统的重要组成部分，与口服耐受关系密切，但在IBD中的作用多年来存在争议。我们前期研究发现口服耐受对葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导结肠炎的保护作用与大肠粘膜γδ T细胞增多相关，小肠上皮内γδ T细胞对DSS诱导的结肠炎具有保护作用，口服耐受处理的细胞调节作用增强，但其具体作用机制并不明确。本项目拟利用过继转移技术评估肠粘膜γδ T细胞在三硝基苯磺酸（TNBS）诱导结肠炎中的作用，在此基础上分析口服耐受对肠粘膜γδ T细胞质和量的影响，通过分析细胞因子、生长因子、细胞识别分子、归巢相关分子的表达及对CD4+ T细胞的增殖抑制效应，探索γδ T细胞发挥作用的机制。该系列研究有助于深入了解炎症性肠病的发病机制及口服耐受的作用机理，为口服耐受及以γδ T细胞为靶点的干预作为炎症性肠病的治疗手段提供理论依据。

炎症性肠病（inflammatory bowel diseases, IBD）是一组病因不明的累及胃肠道的慢性非特异性炎症性疾病，包括溃疡性结肠炎（ulcerative colitis, UC）和Crohn病（Crohn’s disease, CD）。近年来，IBD的发病率不断提高，其发病机制及治疗一直是研究热点。γδ T细胞是肠粘膜免疫系统的重要组成部分，与口服耐受关系密切。项目前期研究发现口服耐受对葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导BALB/c小鼠结肠炎的保护作用与大肠粘膜γδ T细胞增多相关，小肠上皮内γδ T细胞对DSS诱导的结肠炎具有保护作用，但其具体作用机制并不明确。本项目主要利用过继转移技术评估肠粘膜γδ T细胞在三硝基苯磺酸（TNBS）诱导的C57BL/6小鼠结肠炎中的作用，在此基础上分析口服耐受对肠粘膜γδ T细胞质和量的影响，通过分析细胞因子、生长因子、细胞归巢等，探索γδ T细胞发挥作用的机制。目前已取得如下重要结果：建立TNBS诱导的C57BL/6小鼠结肠炎模型，证实口服五次低剂量CEP能缓解TNBS诱导的C57BL/6小鼠结肠炎的症状及组织学损伤；过继转移结肠炎及对照小鼠、口服耐受处理小鼠的小肠上皮内淋巴细胞2 × 10E6或分选的γδ T细胞9 × 10E5， 受体鼠的结肠炎症状及组织学均显著改善，但是SI-IEL对结肠炎的保护作用更强，表明SI-IEL对结肠炎的保护效应部分是由γδ T细胞实现的，口服耐受加强了SI-IEL中调节细胞亚群的抑制效应包括γδ T细胞，这些保护效应与TGF-β1增多、IFN-γ降低、KGF表达增多相关；然而小肠、大肠粘膜淋巴细胞中CD8α+ T细胞和TCRγδ+ T细胞的比例在口服耐受组与对照组之间无统计学差异；过继转移的小肠上皮内γδ T细胞倾向性特异性地锚定于肠道组织。DSS诱导的结肠炎与UC相似，而TNBS诱导的结肠炎与CD相似，因此，该系列研究进一步阐明了IBD与口服耐受的作用机理及肠粘膜γδ T细胞发挥调节作用的机制，获得γδ T细胞参与调节的炎症性肠病治疗的初步实验室资料。