基于液质联用技术和代谢组学方法的酸枣仁黄酮代谢动力学及睡眠调节机制研究

根据我们在酸枣仁黄酮成分提取纯化、催眠活性及其代谢等方面的前期研究，本项目从代谢组学、现代分析技术与生物信息学研究角度，采用液质联用技术为核心手段，结合模式识别技术、系统生物学理论，于在体和离体实验模型上研究酸枣仁黄酮及各单体组分的代谢动力学，研究机体引起的酸枣仁黄酮化学成分代谢变化，发现代谢活性成分并阐明其生物转化规律；从代谢组学角度研究酸枣仁黄酮引起的机体内源性代谢物变化并评价镇静催眠的有效性，同时分析和鉴定潜在生物标志物，并解析其生理意义和代谢途径；以SD大鼠海马神经细胞GABA-A受体激活作用以及受体基因表达的调控、内源性物质成分和含量变化及酶活性变化为指标，观察活性成分、代谢物与机体之间的作用关系。明确酸枣仁黄酮调控机体代谢途径及影响潜在生物标志物的作用机制，深入阐明酸枣仁黄酮调节睡眠的物质基础，揭示其催眠作用机理，为开发酸枣仁黄酮的新型镇静催眠功能食品提供理论基础和科学依据。

本项目采用HPLC-MS/MS研究大鼠体内代谢动力学及其在各组织分布的经时变化规律，明确了酸枣仁黄酮在SD大鼠体内的动态变化规律。采用Q-tof液质联用技术为核心手段，结合模式识别技术、PCA分析和PLS-DA等手段，从代谢组学角度研究酸枣仁黄酮引起的机体内源性代谢物变化，分析了酸枣仁黄酮作用机体后的可能生物标志物。分别用IL-6、IFN-γ、IL-1β、TNF-α、IL-10、IL-4试剂盒，采用双抗体夹心ABC ELISA测定各种细胞因子的含量。通过酶联免疫试剂盒研究酸枣仁黄酮对大鼠脑组织酶活性的影响，结果表明酸枣仁黄酮对γ-氨基丁酸转氨酶有明显的抑制作用。利用MQAE荧光探针技术酸枣仁黄酮对SD大鼠海马神经细胞GABA-A受体激活作用，并用SYBR Green I荧光定量技术，研究酸枣仁黄酮对GABA受体基因表达的影响。结果表明，酸枣仁黄酮各组分在人工培养大鼠海马神经细胞GABA-A受体基因表达及受体激活方面均表现出一定的生物活性，但在作用强度上表现一定的差异。一定程度上阐明了酸枣仁黄酮调节睡眠的物质基础，揭示了其催眠作用机理。为开发酸枣仁黄酮的新型镇静催眠功能食品提供了理论基础和科学依据。