噬菌体phi29转基因保护系统介导的组织特异性高效多位点基因打靶的研究

设计、筛选能特异识别切割大鼠rDNA的间隔序列的人工锌指核酸酶，结合申请者建立的多位点基因打靶技术，构建包括一对锌指核酸酶和人苯丙氨酸羟化酶-氯霉素乙酰转移酶融合蛋白基因的真核表达元件、同源重组序列的多位点基因打靶载体。利用pRNA纳米动力器将打靶载体包装进入人工噬菌体phi29，去唾液酸糖蛋白标记phi29的gp12蛋白。将包装有打靶载体的噬菌体phi29转基因系统经尾静脉注射大鼠体内，去唾液酸糖蛋白受体介导转基因系统特异性地进入大鼠肝脏细胞，经溶酶体降解作用phi29释放多位点基因打靶载体，游离表达锌指核酸酶，切割rDNA间隔序列，诱导高效基因打靶。噬菌体phi29转基因系统通过不同配体标记可以具有各种细胞特异性，外壳蛋白保护打靶载体不被降解，不经药物筛选的基因定点整合效率有望超过18％，外源基因靶向插入后能够稳定表达，将为苯丙酮尿症等遗传病的基因治疗建立新的动物模型与技术平台。