IgA分子糖基化异常损伤肾小球内皮细胞在IgA肾病发病机制中的作用

IgA肾病是最常见的原发性肾小球疾病，其发病机制不清，目前研究公认IgA1分子糖基化异常在IgA肾病发生发展中有重要作用，且糖基化缺陷患者预后差。IgA肾病患者多为青壮年，但病理检查发现其血管病变多见，这种改变是否与糖基化IgA1分子对内皮细胞的损伤有关尚未阐明。内皮细胞可能作为血管损伤的起始部位，在血管病变的发病过程中起着重要的作用。细胞自噬对疾病的影响日益受到重视，多种心血管疾病均可见细胞自噬受损。本研究拟提取血清中的IgA1分子，并通过酶切方法制备糖基化缺陷的IgA1分子，与肾小球内皮细胞共孵育，荧光显微镜示踪自噬体形成，RT-PCR及western blot 检测自噬基因及蛋白表达，检测培养液中内皮素，基质金属蛋白酶，NO 、IL-6、血管紧张素原等表达，阐明IgA肾病血管病变多见的原因，并为治疗寻找新的靶点。

本研究关注IgA分子糖基化异常在IgA肾病发病中的作用。使用商品化正常人血清IgA1，经半乳糖苷酶和/或唾液酸水解酶处理后，制成糖基化缺失的IgA-NA和IgA-NA-GA分子，分别与人脐静脉内皮细胞共孵育，检测细胞自噬发生的情况及后续的生物学效应。结果发现① 糖基化缺失的IgA1分子能够影响内皮细胞自噬。IgA-NA-GA分子在3h就能够显著上调内皮细胞beclin及atg7的表达，12h可以上调LC3II/I的表达，但在48h时，则显示出明显的自噬抑制作用。IgA-NA刺激细胞，未见明显的自噬上调，但孵育48h后内皮细胞自噬受抑制，beclin及atg7表达明显下调，LC3II/I的表达未见明显变化。②检测了细胞孵育后上清中多种细胞因子，包括AngII、ET-1、IL-6等，均未见明显改变；糖基化异常IgA1分子刺激内皮细胞30分钟可见NO分泌显著升高，但12h后则会抑制了NO的分泌；正常人IgA1分子及糖基化异常的IgA分子刺激内皮细胞，均可见MMP-9分泌增多，但各组之间无明显差异。③检测患者体内IgA1分子GalNAc暴露情况，评估血清IgA1GalNAc暴露情况与患者肾活检组织病理改变的相关性后发现，患者体内GalNAc暴露与内皮细胞增生情况不相关，却和肾小球节段硬化及肾小管间质萎缩纤维化相关。④进一步追溯产生IgA1的B细胞，发现患者体内B细胞活化因子（BAFF）浓度升高，且和患者的临床病理表现相关。