巨型艾美耳球虫感染激发宿主产生的CD8+ T细胞TCR的谱型分析

依据近年来寄生原虫保护性抗原的研究成果,我们认为巨型艾美耳球虫感染引起宿主鸡产生完全免疫保护和非交叉保护的特征表明其也存在单一或少数的保护性抗原，且其存在虫株间的差异性。为验证此假设，我们采用TCR谱型分析技术分析巨型艾美耳球虫免疫后产生的特异性CD8+ T细胞的表面受体分子（TCR）CDR3区的谱型特征，通过TCR谱型的偏移变化和优势TCR的产生情况来反映与TCR对应的抗原肽，亦即巨型艾美耳球虫保护性抗原肽的特征，检验是否存在单一或少数的巨型艾美耳球虫保护性抗原。此项研究将揭示巨型艾美耳球虫感染激发宿主产生的CD8+ T细胞TCR的谱型特征，为巨型艾美耳球虫保护性抗原的寻找，继而开发重组球虫疫苗奠定理论基础。

在本项目的资助下，我们依据T细胞受体（T cell receptor, TCR）与其最适合的抗原肽之间存在的“榫和卯”对应关系，通过TCR谱系分析技术（TCR repertoire analysis）揭示了巨型艾美耳球虫免疫后宿主产生的特异性CD8+ T细胞的TCR CDR3的氨基酸序列特征。我们的研究表明，巨型艾美耳球虫3次感染可以激发宿主产生较好的特异性体液免疫应答、细胞免疫应答与肠道粘膜免疫应答。将分选出的CD8+ 肠间淋巴细胞进行RNA提取、cDNA合成，利用TCR特异性引物扩增Vβ1至C区基因。扩增产物经测序及序列分析发现，感染组鸡只T细胞库呈现出3种优势TCR，即AKQDWGTGGYSNMI、AKQGARGHTPLN、AKQDIEVRGPNTPLN；而未免疫组鸡只T细胞库呈多样性。我们还发现了在鸡只中存在一个公有的TCR，即AGRVLNIQY。此项研究初步揭示了巨型艾美耳球虫免疫激发宿主产生的CD8+ T细胞TCR谱系的偏移特征，为巨型艾美耳球虫保护性抗原的寻找，继而开发重组球虫疫苗奠定理论基础。