益气化瘀法对糖尿病溃疡创面愈合过程中血管生成及神经再生影响的机制研究

血管神经病变是糖尿病溃疡创面难愈合主要病理基础。基于对血管和神经系统功能新认识，在既往临床实践和前期研究证实益气化瘀法促糖尿病溃疡愈合及上调VEGF表达，促血管新生机制基础上，将神经、血管作为一个整体功能单位进行研究，围绕"血管生成-VEGF-神经再生-创面修复"重要病理机制，运用神经电生理、神经化学、分子生物学等技术和方法，形态学与功能学相结合，通过运用链脲佐菌素诱导糖尿病神经病变模型2个月后建立糖尿病溃疡模型及其关键指标（血管内皮生长因子及其受体、神经生长因子、神经肽、神经丝蛋白、神经生化标志物、坐骨神经功能指数、神经电生理等）检测，揭示糖尿病溃疡创面愈合过程中不同时间点血管神经再生动态变化规律，益气化瘀法促进糖尿病溃疡愈合过程中血管生成、神经再生及神经功能修复，加速创面愈合机制及益气与化瘀的不同特点及配伍交互作用，为糖尿病溃疡治疗提供更全面整合的作用靶点，为"祛瘀生新"理论提供依据。

血管神经病变是糖尿病溃疡创面难愈合主要病理基础。以Wistar大鼠为研究对象，运用链脲佐菌素诱导糖尿病神经病变模型2个月后建立糖尿病大鼠背部全层皮肤缺损开放性创面模型。随机分为正常创面组、模型组、益气组、化瘀组和益气化瘀组，各组分别给予生理盐水、益气中药、化瘀中药及益气化瘀中药灌胃处理，观察各组糖尿病溃疡大鼠创面愈合率和愈合时间。运用免疫组化、Western blot、RT-PCR方法动态观察创面组织VEGF、VEGFR、NGF、SP、CGRP、NF水平，放射免疫法、ELISA法动态观察溃疡创面组织NSE、S-100β水平，足迹分析法测试大鼠坐骨神经功能指数，SMUP生物信号处理系统测定大鼠坐骨神经电生理，同时观察靶肌小腿三头肌重量。.结果提示，糖尿病溃疡模型组各时相创面愈合率明显降低，创面愈合时间明显延长，VEGF、VEGFR、NGF、SP、CGRP水平以及创面微血管数、坐骨神经传导速度、靶肌小腿三头肌重量明显低于正常组，NSE、S-100β水平明显高于正常组。益气化瘀组能加速创面愈合，缩短愈合时间，益气化瘀组优于益气组或者化瘀组。第3、7、14、21天，益气化瘀组、益气组、化瘀组均能上调VEGF、VEGFR、NGF、SP、CGRP水平，降低NSE、S-100β水平。益气化瘀组优于益气组或者化瘀组。益气组与化瘀组比较，第14、21天，益气组VEGFR水平高于化瘀组，第7、14天，益气组微血管数目低于化瘀组。第14天，益气组NGF水平高于化瘀组（Western-Blot），第21天，益气组NGF水平低于化瘀组（RT-PCR），第3、7、14天益气组SP水平高于化瘀组（RT-PCR）），第21天，益气组SP 水平高于化瘀组（Western-Blot），第21天，益气组CGRP水平低于化瘀组（RT-PCR）。第14、21天，益气组CGRP 水平高于化瘀组（Western-Blot）。第7天，益气组NSE水平低于化瘀组，第14、21天益气组S-100β水平高于化瘀组。.益气化瘀组、益气组、化瘀组能改善糖尿病溃疡大鼠坐骨神经功能，提高神经传导速度和靶肌小腿三头肌重量。益气化瘀组在改善坐骨神经功能，提高靶肌重量方面优于益气组、化瘀组，益气组在改善坐骨神经功能方面优于化瘀组。电镜形态学观察亦显示益气化瘀组、益气组、化瘀组大鼠坐骨神经形态和排列顺序有改善，益气化瘀组改善尤明显