Osteopontin介导Bim调控B细胞自身功能参与实验性自身免疫性重症肌无力发生、发展的实验研究

Experimental Autoimmune Myasthenia Gravis is(EAMG）an animal model of myasthenia gravis （MG）,is a rare organ-specific autoimmune disease targeting the autoantigen nicotinic acetylcholine receptor (AChR). It has demonstrated that the major reason caused the disease is the antibody secreted by the activated B cell. Some papers showed that the prolonged survival of B cell, which was related with the expression of pro-apoptosis gene Bim, played very important role in autoimmune disease.The results in our preliminary experiment showed that the expression of Bim is reduced after stimulation in B cells. This reflect that there should be any relationship between Bim and the disease EAMG. Also, other's paper showed that Osteopontin could regulate the pro-apoptosis role of Bim and in our experiment we found that after stimulated by osteopontin, the expression of Bim is decreased in B cells. All of these indicated that Bim and Osteopontin maybe could affact the survival of B cell during the development of EAMG. Base on thess and our preliminary experiment results, our research aim to find out the gaps in the regulation among Osteopontin-Bim-B cell in immunal system and in the development of EAMG, that can enrich the theoretical content of how MG/EAMG occurrence and we can provide a new theretical basis and experimental foundation for MG clinical treatment.

重症肌无力（MG）是B细胞介导T细胞依赖的自身免疫性疾病，以往对其发病机制研究过分强调了T细胞对B细胞的调节，忽视了B细胞自身调节作用。我们前期实验证实B细胞自我调控在MG/EAMG中的作用尤为重要，并提出Osteopontin-Bim-B细胞免疫调节轴这一新概念，即当B细胞受到OPN活化后导致其内促凋亡基因Bim表达下降，自身反应性B细胞清除减少，大量带有针对自身神经肌肉接头处乙酰胆碱受体抗体的B细胞在体内蓄积，分泌抗体，促使MG/EAMG发生。本课题以MG/EAMG为研究对象，利用Bim基因敲除鼠、OPN体内预防性治疗等平台旨在研究在MG/EAMG中OPN、Bim如何参与疾病过程；阐明Bim对B细胞增殖、凋亡、抗体分泌的影响及具体途径；确定影响Bim作用的相关因素，探讨Opn-Bim-B细胞免疫调节轴具体机制。这些问题解决不仅丰富MG/EAMG发病机制内容，对临床靶点治疗MG意义重大。

重症肌无力（Myasthenia Gravis,MG）是一种B细胞介导的，T细胞依赖的自身免疫性疾病，AChR特异性T、B细胞在体内大量沉积是导致MG发生的关键因素，我们发现AChR特异性B细胞随着疾病进展比例逐渐上升，且与骨桥蛋白（Osteopontin，OPN）、Bim之间存在相关性。本课题旨在阐明：1、OPN与EAMG发生、发展之间的关系；2、OPN对AChR特异性T、B细胞的影响；3、OPN-Bim-T\B细胞之间的相关性。.经过四年的研究工作，我们如期完成了课题内容。首先，我们建立了稳定的MG动物模型-EAMG，在此基础上证实了：1、在EAMG发生、发展过程中，OPN在血清中的表达升高；2、脾细胞中OPN在RNA和蛋白水平表达均上升，说明OPN参与了EAMG疾病过程；3、AChR特异性B细胞的比例随疾病发展表达升高；4、AChR特异性B细胞活化与Bim表达下降相关，这说明Bim活性受到抑制后阻断了自身免疫性B细胞凋亡。我们分别通过构建真核表达载体和原核表达载体来分离纯化大鼠OPN蛋白，随后进行了体内外实验证实了：1、OPN体内注射后，EAMG大鼠发病提前，体重偏低，并且血清中抗AChR特异性抗体分泌增加；2、体外加入OPN刺激后，AChR特异性脾细胞凋亡率下降，且Bim的表达同时下降，这说明OPN可以抑制凋亡且与Bim通路相关；3、体外加入OPN刺激后，Th1比例上升，Treg比例下降，这表明OPN打破Th细胞之间网络平衡参与EAMG发病过程。通过该课题的研究丰富了EAMG发病机制理论，完善了OPN-Bim参与自身免疫性疾病的机制，为临床治疗提供新的靶点和方向。.我们所取得的成果以科研论文的形式发表文章4篇，其中SCI收录2篇，核心期刊2篇，SCI论文手稿1篇（现在修稿阶段），硕士研究生3名（2名已经毕业，1名在读），圆满的完成了科研课题。