肉蔻五味丸对抑郁症大鼠海马神经再生的调控作用及机制研究

This project is a further study of the Inner Mongolia Natural Science Fund Project"the antidepressant effect of Mongolian medicine Roukou Wuwei Pill and its molecular mechanism"。Has confirmed the antidepressant mechanism of Roukou Wuwei Pill by improving cerebral monoamine neurotransmitters and regulate the HPA axis function.In particular,there is an up regulation of BDNF in hippocampus.In this study,the key AMP-CREB-BDNF signaling pathway of hippocampal nerve regeneration was used as the breakthrough point,and the model of rat CUMS was established to determine the regulatory and mechanism of hippocampal nerve regeneration.In this study,Western-blot,TaqMan RT-PCR,ELISA and immunohistochemistry were used to detect hippocampal nerve regeneration of related signal pathway proteins,genes and apoptosis factors,and in order to reveal the mechanism of Roukou Wuwei Pill action is to change the expression of mi-RNAs,further regulate the expression and function of BDNF and CREB.This study from the whole tissue cell molecule four levels and multiple ways to elaborate the mechanism of Roukou Wuwei Pill regulatory of hippocampal nerve regeneration and specific targets,provide the basis for clinical application,to provide the basis for further research and development.

本项目是内蒙古自然科学基金项目"蒙药肉蔻五味丸的抗抑郁作用及其分子机制研究"的深入和拓展。已证实肉蔻五味丸通过提高脑内单胺递质及调节HPA轴功能等机制发挥作用。特别是对海马BDNF具有上调作用。故本研究以海马神经再生的关键性cAMP-CREB-BDNF信号通路为切入点，通过构建大鼠CUMS模型，旨在明确其对抑郁症大鼠海马神经再生的调控作用及机制。研究采用Western blot、TaqMan RT-PCR、ELISA和免疫组化等技术，调控海马神经再生的信号通路蛋白、基因、凋亡因素进行检测。重点阐述具有调控cAMP-CREB-BDNF通路靶基因表达功能的miRNAs差异表达，揭示肉蔻五味丸是否通过改变这些miRNAs表达，进而调控BDNF和CREB表达及功能机制发挥作用。本研究从整体-组织-细胞-分子等四层次、多途径阐明其调控海马神经再生的机制及具体靶点，为临床应用与研发提供依据。

本研究应用了慢性轻度不可预知性应激刺激(CUMS)，经28天的CUMS结合孤养方法建立了大鼠抑郁模型，并蒙医验方肉蔻-5味丸干预，以1%蔗糖水消耗试验进行质量评估，结果造模比较成功。首先，通过Open-Field 实验和Morris 水迷宫实验等抑郁行为学检测，初步评价肉蔻-5味丸对大鼠自主活动和大鼠学习记忆能力影响。行为学检测结束后取材制备样本，以ELISA、IHC、Western Blot、PNCA荧光染色和qRT-PCR等技术检测了大鼠海马组织相关指标，主要围绕检测PI3K-AKt信号通路及Bcl-2、Bax凋亡蛋白表达，结合PNCA荧光染色探究了肉蔻-5味丸对抑郁症模型大鼠海马组织神经再生与保护作用。结果发现，肉蔻-5味丸能够调控抑郁症大鼠海马神经再生的相关信号通路的连锁反应式功能，其主要途径为通过调控抑郁症大鼠海马PI3K-AKt保护与再生信号通路，发挥抗细胞凋亡，促进细胞再生作用。另外，检测了肉蔻-5味丸通过调控cAMP-CREB-BDNF信号通路及其关键性信号通路靶基因miRNA-132、miRNA-182表达。结果肉蔻-5味丸干预后抑郁症大鼠海马组织的与 BDNF和CREB 靶基因表达调控的关键性miRNA-132和miRNA-182的表达存在明显差异。因此，肉蔻-5味丸能够调控抑郁症大鼠海马神经再生的内在机制与其调控海马神经再生的关键性靶基因miRNA-132、miRNA-182表达，进而调控cAMP-CREB-BDNF信号通路的机制有关。总之，本研究为肉蔻-5味丸的进一步研究及开发利用奠定了坚实的工作基础。项目资助已发表了2篇论文，待发表2篇核心期刊论文，其中1篇论文已收录于“中华中医药杂志”。培养2名硕士研究，1名博士研究，并均取得学位。