DKK-1在间充质干细胞诱导免疫耐受机制中的调控作用

Allergenic hematopoietic stem cell transplantation is an effective treatment for malignant hematopoietic disorders, but it exists a problem of graft versus host disease and needs a long time to re-establish self-tolerance due to MHC barrier. Recent studies have shown that MSCs could improve the non-specific immune suppression and antiproliferation role. Although mixed transplantations of donor MSCs and PBSC can prevent GVHD and induce immunologic tolerance, opinions differ on its mechanism of regulatory effects.Dickkopf-1（DKK-1）as a new endocrine factor has become a hot issues and is associated with the functions of cell proliferation and secretion. Our preliminary findings demonstrated that decreased expression of DKK-1 in MSCs could compensate for the inhibitory effect in T lymphocyte. Therefore, to validate the functions of the potential MSCs,we investigate the effects of immunity regulation of DKK-1 toward receptor's DC、Treg at molecular, cellular and animal model levels by co-culture method, RNAi and overexpreesion system. The Eluciating Mechanism of DKK-1 regulatory effects on MSC-induced Immunologic tolerance, will open up an new way for the prevention of GVHD and re-establish self-tolerance.

异基因造血干细胞移植是根治恶性血液病的最有效方法，但由于MHC屏障，存在移植物抗宿主病（GVHD）发生率高、免疫重建慢等问题。近年来的研究发现，间充质干细胞（MSCs）具有非特异性的免疫抑制和抗增殖作用。加入供者骨髓MSCs的混合移植能够有效地防治GVHD、诱导免疫耐受，但对MSCs作用机制看法不一。而Dickkopf-1（DKK-1）分子是一个新进热点研究的内源性分泌因子，参与细胞的增殖、分化等过程。我们预实验结果显示，抑制MSCs 细胞DKK-1的表达，能够抵消MSCs对T细胞增殖的抑制作用。因此，本实验拟从细胞及分子水平，采用RNAi和真核表达质粒转染技术，抑制或过表达DKK-1后，通过体外共培养等方法研究骨髓MSCs对受者细胞毒T细胞、Treg、DC等细胞调节作用，阐明DKK-1分子在MSC诱导免疫耐受中的作用机制，为提高移植效率、预防GVHD和免疫功能重建奠定理论基础。

Dickkopf-1（DKK-1）分子是一个新进热点研究的内源性分泌因子，参与细胞的增殖、分化等过程。本实验从细胞及分子水平，采用RNAi技术，抑制干细胞DKK-1的表达，再通过体外共培养等方法研究MSCs对T细胞、Treg等细胞调节作用，阐明DKK-1分子在MSC诱导免疫耐受中的作用机制，为提高移植效率、预防GVHD和免疫功能重建奠定理论基础。.实验结果显示，抑制MSCs 细胞DKK-1的表达，不仅能够抵消MSCs对T细胞增殖的抑制作用，并且影响MSCs分化及细胞因子分泌等生物活性。与其他已报道参与MSCs抑制T细胞增殖的细胞因子如TGF-β1、PGE2及NO有相似作用结果。对胞内主要信号转导因子实验结果表明，靶向DKK-1的siRNA与DKK-1单克隆抗体对胞内信号因子的作用结果并不完全相同。另外在T细胞增殖实验体系中加入重组DKK-1蛋白，T细胞增殖被明显抑制，DKK-1浓度分别是分别是200 ng/ml、500 ng/ml、1000 ng/ml、2000 ng/ml及5000 ng/ml，结果显示没有随着DKK-1浓度的增加，T细胞增殖抑制越明显。.近年来，随着对MSCs研究的不断深入，其免疫调节及抗增殖作用在移植排斥研究中越来越受到广大学者的关注，但对其作用机制看法不一。本课题深入研究DKK-1在MSCs诱导免疫耐受中的调控机制，为MSCs在造血干细胞移植中的应用建立理论基础。.