Aldo调控Dot1/AF9甲基化与p38MAPK对AKI肾小管上皮细胞Kim-1表达的影响

肾小管上皮细胞是AKI发生时主要受损的靶细胞，Kim-1仅在肾小管上皮细胞表达，是早期诊断AKI的生物学标志。有关调控Kim-1基因表达的机制不明。文献报道, AKI时全身或局部醛固酮(Aldo)升高，使钠通道开放，p38MAPK通路激活，导致AKI发生发展。本组前期研究显示，AIdo可影响组蛋白甲基化转录子Dot1/AF9形成，调控肾小管上皮细胞基因转录；文献也证实了p38MAPK与Kim-1表达关系密切。因此，我们推测AKI时，高Aldo水平通过影响Dot1/AF9甲基化状态和p38MAPK而调控肾小管上皮细胞Kim-1基因表达。本研究拟通过肾I/R模型进行体内外研究，从整体与细胞水平来验证该假设，阐明AKI时Kim-1靶基因调控机制，明确"Aldo-Dot1/AF9-p38MAPK-Kim-1"信号通路在AKI发生发展中的作用与地位，为寻找AKI治疗的靶基因和新药的研发提供理论依据。

急性肾损伤（acute kidney injury，AKI）是临床常见的危急重症。业已证明，AKI由多种病因所致，其病理生理机制错综复杂，归纳其发病机制主要与缺血缺氧、创伤、炎症反应、氧化应激和凋亡等因素有关，特别是近年的文献表明，AKI时机体及肾脏局部出现高醛固酮（aldosterone，Aldo）水平介导肾脏损伤，应用Aldo抑制剂安体舒通和行肾上腺切除术能对大鼠缺血再灌注（ischemic/reperfusion，I/R）损伤所致AKI起到明显的肾保护作用。新近研究认为，在早期AKI的诊断指标中，Kim-1是缺血及肾毒性肾损伤的生物标记物，在正常肾组织几乎不表达，而在缺血及肾毒性损伤后的近曲小管上皮细胞中高表达。AKI时高Aldo血症和肾小管上皮细胞损伤相关指标Kim-1高表达并存，提示Aldo可能调控Kim-1的表达。.　　本课题在动物模型及细胞水平两方面验证了AKI时Aldo为Kim-1表达的上游调控因子，证明：（1）细胞模型中，ELISA证实损伤模型组细胞培养液中Aldo较对照组明显升高；RT-PCR证实Dot-1及AF9表达较对照组明显减少，Kim-1及P-P38表达较对照组明显升高（待发表）；（2）细胞模型中，Western blotting证实损伤组中加入安体舒通可明显增加Dot-1及AF9的表达，减少Kim-1、P38、P-P38的表达（待发表）；（3）细胞模型中，western Blotting证实损伤组中加入SB203580可明显减少Kim-1、P38、P-P38的表达（待发表）。（4）在小鼠I/R损伤模型中Aldo较对照组明显升高，安体舒通及P-38抑制剂对于AKI小鼠肾脏具有保护作用；由此在细胞水平上证实I/R损伤时肾小管上皮细胞中Aldo通过影响Dot1/AF9甲基化修饰与激活p38MAPK信号转导通路，上调肾小管上皮细胞Kim-1基因表达，并在动物模型中初步验证了这一结论。.　　另外，我们还进一步研究了Dot-1/Af9在糖尿病肾病及肾脏水盐调节中的功能（发表相关SCI2篇），进一步证实Dot-1/Af9在肾脏疾病中起到了重要作用。.　　该项目完成后共发表论文7篇。培养研究生共7名。美国ASN年会壁报交流2次。2014年获得中南大学临床大数据库项目资助（100万）。拟申报湖南省科技成果奖1项。