革皮氏海参中主要皂苷单体规模化制备、结构解析及吸收代谢的研究

课题针对我国海参产业快速发展需要亟待解决的理论问题- - 海参功能因子的活性作用机制，系统开展尚未被同行探索的海参皂苷在生物体内吸收方式、代谢规律及活性作用机理这一新方向的研究。课题以申请人前期筛选出的革皮氏海参的皂苷单体为对象，采用高速逆流色谱（HSCCC）规模化制备技术纯化制备海参中4种主要皂苷单体。建立血清中皂苷化合物的液相色谱二级质谱联用（LC-MS/MS）痕量分析方法，对海参皂苷单体化合物在生物体内的吸收方式进行研究，并对海参在体内代谢产物进行结构解析，阐明海参皂苷在体内的吸收方式、代谢过程中皂苷结构变化规律，揭示海参功能因子的活性作用机制，减少海参功能食品设计的盲目性，为海参产业健康发展提供理论支撑。

课题组经过三年的努力，完成了课题计划中规定的研究内容，并取得了系列研究成果。. 建立了革皮氏海参海参总皂苷高效液相色谱法分析方法，对革皮氏海参中的三萜皂苷成分进行了分离纯化及结构鉴定。从革皮氏海参海参中分离纯化得到10个皂苷化合物，粗总皂苷的得率超过了海参干重的10%，对其中8个化合物进行了结构鉴定，其中化合物3（ds - echinoside A）为首次从自然界中分离得到。. 建立了高速逆流色谱分离制备革皮氏海参皂苷的方法，得到两种主要皂苷成分holothurin A和echinoside A，得率接近海参干重的1.4%，其纯度均在93%以上。与传统的硅胶层析方法相比，溶剂消耗减少30%，分离时间缩短40%，化合物的提取得率提高了1倍多。. 分析了海参皂苷的多级质谱裂解行为，总结了皂苷的裂解规律。应用电喷雾正负离子两种模式对分离得到的皂苷单体进行了二级质谱研究，研究了主要特征碎片离子和裂解模式和皂苷单体化合物的质谱裂解途径，得到了皂苷的裂解规律。. 建立了大鼠血清中痕量海参皂苷定量分析方法。皂苷单体echinoside A和皂苷单体holothurin A在血清中的检测限达到1ng，定量限分别达到3ng和10ng，为海参皂苷代谢研究建立了监控手段。. 研究了皂苷单体在体内吸收代谢规律。首次明确了海参皂苷单体echinoside A和单体holothurin A的消化吸收速率，明确了海参皂苷的体内代谢动力学规律，为海参皂苷的使用和药用提供了科学依据