氧化槐定碱对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用机制的研究

氧化槐定碱（oxysophoridine，OSR）是从宁夏特色植物苦豆子中提取的主要生物碱之一。本课题组前期研究表明OSR具有降低大鼠脑皮质、海马区谷氨酸含量，拮抗神经元钙超载等作用，提示OSR具有良好的脑保护作用。本研究拟采用大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型和原代培养大鼠海马神经元氧、糖剥夺再灌注损伤模型，利用脑电记录、免疫组化法、ELIAS、Western Blot、RT-PCR等技术，通过检测整体动物神经功能缺陷、EEG、脑梗死面积等指标，观察OSR对脑缺血再灌注损伤的保护作用；通过对损伤侧脑组织及原代培养海马神经元内谷氨酸、Ca2+含量，GLT-1、NMDA受体及其NR1亚基mRNA表达等指标的分析，探讨OSR对脑缺血再灌注损伤的保护作用与抗Glu兴奋性神经毒的关系，以期阐明其作用机制，为研究OSR应用于脑缺血再灌注损伤的治疗，为宁夏地方资源优势转化为经济优势提供基础理论和实验依据。

摘要：氧化槐定碱（oxysoPhorideine，OSR）是从豆科槐属植物苦豆子中分离提取的主要生物碱之一，苦豆子在宁夏荒漠地带有大量的野生和人工栽培资源。本课题组对氧化槐定碱前期研究结果显示：（1）氧化槐定碱能使正常大鼠皮层、海马Glu免疫反应阳性细胞数显著下降。（2）氧化槐定碱能够拮抗CaCl2引起的神经细胞钙超载。本课题拟通过构建整体小鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型和原代培养的大鼠海马神经元缺糖缺氧再灌注损伤模型，从OSR抗氧化应激、抗炎、抗凋亡等多层面深入探讨氧化槐定碱对小鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及可能的机制。结果表明：（1）OSR可明显缓解因脑缺血再灌注引起的小鼠神经功能障碍，减少脑梗死体积(P<0.01)。降低因缺糖缺氧引起的大鼠海马神经元细胞的凋亡率(P<0.05，P<0.01)。（2）OSR对脑缺血再灌注引起的抗氧化酶活性降低有明显的抑制作用(P<0.01)。（3）与模型组相比，OSR可明显减少神经细胞培养液中谷氨酸的含量，抑制大鼠海马神经元NMDA受体NR1亚基蛋白和mRNA的表达（P＜0.05，0.01）。OSR（250mg/kg）可明显抑制小鼠脑缺血再灌注损伤侧脑组织皮层NMDA受体NR1亚基mRNA和蛋白表达（P＜0.05，0.01）。（4）与模型组比较，OSR (125, 250 mg/kg)组可显著降低NF-κB在皮质的表达，降低炎症因子IL-1、IL-6、IL-8等的表达(P<0.05，P<0.01)。（5）OSR（250 mg/kg）可明显升高脑缺血再灌注损伤小鼠损伤测脑组织中procaspase-3、Bcl-2蛋白的含量(P<0.05，P<0.01)。与模型组相比，OSR能明显降低大鼠海马神经元细胞Caspase-3、Caspase-9、 Caspase-8的活性（P＜0.05，0.01）。与模型组相比，OSR（250 mg/kg）能明显降低大鼠海马神经元细胞Bax、PARP-1蛋白的表达（P＜0.01），升高Bcl-2蛋白的表达（P＜0.01）。以上结果提示OSR对脑缺血再灌损伤具有良好的保护作用，其机制可能与抗氧化应激、减轻谷氨酸毒性、抑制炎症反应和抗神经细胞凋亡有关。本项目研究结果为充分利用我区的优势原料药苦豆子生物碱类也为新型治疗脑卒中药物的开发提供了实验室研究数据。