用cDNA-AFLP技术鉴定被氧信号传导蛋白Org35激活表达的基因

氧和铵是调节生物固氮的两个重要环境信号因子，即高浓度的氧和铵抑制固氮作用。最近我室从巴西固氮螺菌中克隆到一个与氧信号传导有关的新基因，将其定名为org35。Org35是一个杂合双组份信号传递蛋白，包括3个结构域：N-端PAS结构域、中间区组氨酸激酶结构域及C-端响应信号蛋白结构域。磷酸化试验表明，组氨酸激酶结构域能自我磷酸化并能将磷酸基团转移到C-端响应调节蛋白结构域使其磷酸化。我们推测磷酸化的Org35蛋白作为转录因子激活其他基因的表达。本研究拟利用cDNA-AFLP技术确定被Org35蛋白激活表达的基因。主要研究内容是：首先对进行磷酸化信号传导的组氨酸激酶结构域和响应信号调节蛋白结构域缺失而构建org35突变株；从野生型和org35突变株中分别提取总RNA和cDNA合成；cDNA-AFLP和PAGE分析从中鉴定出在org35突变株中差异表达的的基因；对差异表达的基因进行序列和功能分析。