HMGB1诱导EAM小鼠Th17细胞增多的机制研究

HMGB1是一种重要的炎症介质，参与多种疾病的发生，其对免疫应答的调节作用是近年来备受关注的研究热点。我们在小鼠实验性自身免疫性心肌炎（EAM）研究中发现，HMGB1体外能诱导Th17细胞增加；EAM时外周血HMGB1和Th17细胞均增多，心肌中有大量Th17细胞浸润，后者与心肌细胞的持续损伤有关。已知HMGB1的释放先于Th17细胞的增加，是组织损伤的早期事件。因此，提出EAM时Th17细胞水平的增高源自于HMGB1作用的假说。为证明以上假说，本课题拟从以下两方面进行，体外探讨HMGB1对Th17细胞的影响（如分化、增殖等），并阐明其分子机制；体内通过Brdu标记的na?ve CD4+T细胞过继转移、HMGB1拮抗剂rA-box对EAM模型的干预，进一步明确HMGB1诱导Th17细胞增多的机制及其在EAM发生中的作用。为开展以HMGB1为靶向的自身免疫性心肌炎的免疫干预治疗提供理论依据。

在国家自然科学基金青年项目的资助下，按照预期的研究目标（阐明HMGB1对Th17细胞调控的机制（凋亡、增殖、分化）；明确Th17细胞在实验性自身免疫性心肌炎（EAM）发生、发展中的作用；体内通过对HMGB1的干预观察其调控Th17细胞，参与EAM发生的机制）展开工作并做了一定的扩展研究：. 首先，克隆表达了HMGB1 B box蛋白，制备了其单克隆抗体，成功筛选到了两株分泌抗HMGB1 B box的细胞株，分别命名为1D2F4E3和2D4E3A2，两株细胞株分泌的抗体均为IgGα，κ型，申请了发明专利（拮抗HMGB1 B box的单克隆抗体及其应用.201210016550.3），该专利已授权。. 其次，体外分离CD4+T细胞，并利用HMGB1进行刺激，发现HMGB1体外有利于Th17细胞的扩增；体内使用MyHC-α614-629成功诱导小鼠EAM模型；心肌组织通过病理分析及免疫荧光染色发现Th17细胞浸润心肌；使用抗HMGB1 B box单克隆抗体进行干预后，病理分析发现在未干预组心肌组织边缘区有大量的淋巴细胞浸润，而在干预组淋巴细胞的浸润明显地减轻。心肌组织病理评分发现，HMGB1单克隆抗体干预后，心肌炎症明显减轻。而且研究也发现在EAM后期会伴有心肌纤维的沉淀，而HMGB1抗体干预后心肌纤维沉积减轻。. 再次，在青年基金的资助下一方面阐明EAM时高水平的IL-17通过PKCβ-ERK1/2-NF-кB信号通路导致心肌的纤维化；另外一方面证实EAM时高水平的HMGB1不仅仅来源于坏死细胞、浸润的免疫细胞、心肌细胞、心肌内皮细胞，心肌成纤维细胞在外界压力刺激下也会主动分泌HMGB1，主动分泌的HMGB1通过自分泌途径导致心肌的纤维化。当然对病人标本研究也发现HMGB1通过调节Th17细胞参与了类风湿性关节炎的发生；此外也证实Th17细胞参与了子宫内膜异位症以及神经病理性疼痛的发生。. 在本项目的资助下共发表学术论文18篇（SCI 8篇）；培养博士研究生1名、硕士研究生2名，其中博士研究生毕业论文获江苏省优秀博士论文；获江苏省科技进步奖1项；授权发明专利1项；参加国际会议两次，国内学术会议两次；完成预期的研究目标。