基于iTRAQ技术的金丹配伍抗再灌注性心律失常作用的心肌蛋白质组学研究

研究证明丹参酮能明显抑制心肌细胞内钙超载，具有钙通道阻滞作用，可增加心电稳定性并减少心律失常发生；乌腺金丝桃黄酮类物质具有明显抗心律失常作用，二者配伍在临床上对抗心律失常具有有显著增效作用。.本课题基于大鼠在体心肌缺血再灌注模型，进一步观察乌腺金丝桃与丹参配伍对大鼠在体心肌缺血再灌注损伤引起的再灌注性心律失常的保护作用；在此基础上应用比较蛋白质组学方法-iTRAQ，研究缺血心肌差异蛋白质的表达，阐明乌腺金丝桃与丹参配伍抗再灌注性心律失常的分子生物学机制，找出此保护作用的关键蛋白质，发现新的有抗再灌注性心律失常作用的药物靶点；阐明乌腺金丝桃与丹参配伍意义，为创新药物设计提供基础材料，为中药配伍理论提供实验依据。

目的：观察金丹活性部位对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用，并探讨其作用机制。.方法：1. 乌腺金丝桃与丹参（1:2）经水、80%乙醇各回流提取3次后，将提取物通过AB-8型大孔树脂柱经水、30%乙醇、60%乙醇、90%乙醇进行洗脱，得4个洗脱部位，分别作用于心肌缺血再灌注损伤大鼠，观察其对大鼠血清CK含量及心肌梗死面积的影响，筛选出金丹抗心肌缺血再灌注损伤的活性部位。.2. 通过观察金丹活性部位对模型大鼠心律失常出现时间、持续时间及每分钟心律次数的影响，说明金丹活性部位对模型大鼠心律失常具有较好的保护作用。.3. 通过光镜、电镜观察金丹活性部位对模型大鼠心肌病理形态及超微结构损伤的影响，说明金丹活性部位对大鼠心肌具有较好的保护作用。.4. 观察金丹活性部位对模型大鼠血清SOD、MDA、NO、NOS的含量，心肌Bax、Bcl-2蛋白表达及c-fos mRNA表达的影响，并应用iTRAQ技术对其进行蛋白组学研究，从而探讨金丹活性部位抗心肌缺血再灌注损伤的作用机制。.结果：.1. 金丹60%乙醇洗脱组分与水洗脱组分均能明显降低模型大鼠血清CK含量及心肌梗死面积，说明金丹60%乙醇洗脱组分与水洗脱组分为金丹抗心肌缺血再灌注损伤的活性部位，并可明显改善模型大鼠心肌病理形态及超微结构损伤。.2. 金丹60%乙醇洗脱组分与水洗脱组分均能明显延长心律失常出现时间，缩短持续时间，明显改善模型大鼠心动过速。.3. 金丹60%乙醇洗脱组分与水洗脱组分均能明显降低模型大鼠血清MDA的含量，增强SOD的活力。.4. 金丹60%乙醇洗脱组分与水洗脱组分均可明显升高模型大鼠血清NO含量，增强TNOS的活性，降低iNOS的活性。.5. 金丹60%乙醇洗脱组分与水洗脱组分均能明显上调模型大鼠心肌Bcl-2蛋白表达，下调Bax的蛋白表达。.6. 金丹60%乙醇洗脱组分与水洗脱组分均能明显降低心肌缺血再灌注损伤大鼠c-fos mRNA的过度表达。.7. 60%乙醇洗脱组分作用的靶蛋白31个，其中17个蛋白表达下调，14个蛋白表达上调。水洗脱组分作用的靶蛋白30个，其中13个蛋白表达下调，17个蛋白表达上调。两组共同的靶蛋白12个，其中6个蛋白表达下调，6个蛋白表达上调。