非编码RNA-UCA1启动子转录调控及其在细胞增殖中的作用

通过针对性地干预某些转录因子与启动子结合逆转基因的异常表达，己经成为肿瘤治疗的新模式。前期研究发现UCA1是一个与胚胎发育及膀胱癌发生相关的长非编码RNA，生物信息学预测其启动子活性区域存在多个转录因子结合位点，其中包含与肿瘤密切相关的C/EBPα和c-Ets-2保守的结合位点。本研究拟构建启动子区域系列删除报告基因重组体和启动子活性区域转录因子结合位点定点突变体，对核心启动子进行精细定位；染色质免疫共沉淀和凝胶迁移实验分析C/EBPα和c-Ets-2与 UCA1基因启动子区的结合状态；以C/EBPα和c-Ets-2抑制剂及激活剂，C/EBPα和c-Ets-2 shRNA及表达载体等分别作用肿瘤细胞，探讨C/EBPα和c-Ets-2对UCA1的转录调控途径。旨在阐明UCA1转录调控机制及其对膀胱癌细胞增殖、凋亡的影响，为深入研究UCA1基因及寻找新的治疗药物和作用靶点奠定基础。

本项目前期研究发现UCA1是与膀胱癌发生发展密切相关并且具有原癌基因性质的长非编码RNA。利用生物信息学软件分析确定了UCA1启动子和核心启动子的位置，并且发现在UCA1核心启动子区中存在多个转录因子结合位点，其中包括转录因子Ets-2和C/EBPα。本项目在前期研究基础上，深入研究了UCA1上游转录调控的具体分子机制及其对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响。研究结果显示在正常条件下转录因子Ets-2和C/EBPα分别与UCA1核心启动子区上相应的转录因子结合位点结合，上调UCA1的转录与表达，从而促进膀胱癌细胞的增殖抑制细胞凋亡。并且转录因子Ets-2激活UCA1的转录，通过AKT信号通路诱导了膀胱癌细胞的凋亡。本项目研究还发现在缺氧条件下，转录因子C/EBPα的表达与转录激活能力均被缺氧诱导因子HIF-1α所下调，使其不能激活UCA1在缺氧条件下的转录与表达。此外，HIF-1α作为转录因子可以与UCA1启动子区的两个缺氧诱导反应元件结合，激活UCA1在缺氧条件下的转录与表达。本项目阐明了长非编码RNA UCA1在膀胱癌中异常表达的分子机制，发现在不同的氧条件下，不同的转录因子分别调节了UCA1的转录与表达。亦可以通过干预UCA1的转录与表达，抑制UCA1促进膀胱癌发生发展的生物学作用，为膀胱癌治疗提供了新的治疗策略。目前本项目已发表SCI论文1篇，中文核心期刊论文2篇，参加学术交流会议2次。