益肾活血法对EAE小鼠CXCR4信号转导通路介导的T细胞免疫反应作用机制研究

Multiple Sclerosis (MS) is autoimmune disease involving the interaction between individual with liability and environmental factors. On the basis of the overview to pathogenesy theory of Traditional Chinese Medicine (TCM) for MS, we set up the method of reinforcing kidney and activating blood therapy. From the aspects of pathogenesis and pathological changes localization, we interpreted that the basic pathogenesis characteristic was brain marrow and collateral injury due to deficiency of kidney-essence, function disharmony of entrails, recurrence of exogenous evil. On the other hand, the direction to treatment according to reinforcing kidney and activating blood was brought forward.MS was occured which peripheral immune cells to migrate to the CNS through the blood-brain barrier. we research the roles of CXCR4 activation signaling pathway mediated T cell responses in EAE nerve injury. According to pathological change of EAE is picked out as signaling molecule in order to research CXCR4 activation signaling pathway in acute stage and recurrence stage. Through CXCR4 activation signaling pathway, we will cut in the initial empirical study on its animal models-experimental allergic encephalomyelitis (EAE) with sensitive, high-incidence rate, stable mice-SJL mice. Research the mechanisms of immune injury of the central nervous system in EAE and link affected by the TCM prescription .From the analysis of the signal transduction mechanism and immune regulation in EAE with TCM prescription, we will supply the basis for seaking the preponderance in treating MS with the TCM and exploring the best opportunity of clinical intervention with the TCM.

多发性硬化（MS）是遗传易患个体与环境因素相互作用而发生的自身免疫性疾病。本研究在提出MS肾精不足，浊瘀痹阻络脉，督脉、脑髓失养，络损髓伤，败坏形体的病机理论基础上，创立益肾、活血的治疗法则，应用具有补肾活血作用的中药复方益肾达络饮治疗MS。本研究采用SJL小鼠制作实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）复发－缓解模型，以引起中枢神经系统（CNS）自身免疫反应的始作俑因素- - -外周免疫细胞透过血脑屏障迁移至CNS这一病理过程为切入点，通过研究EAE小鼠CXCR4信号通路介导趋化T淋巴细胞进入CNS的作用，从急性期与复发期2个时点，分析CXCR4信号通路对T细胞介导自身免疫反应的影响。通过体内、体外两种路径研究CXCR4信号通路与神经细胞凋亡和修复之间的关联，揭示EAE的CNS免疫损伤机制及其益肾活血方药作用机制。深入探求中医药治疗多发性硬化的作用机理，为中药治疗多发性硬化提供科学依据。

多发性硬化（MS）是遗传易患个体与环境因素相互作用而发生的自身免疫性疾病。本研究提出MS肾精不足，浊瘀痹阻络脉，督脉、脑髓失养，络损髓伤，败坏形体的病机理论基础上，创立益肾、活血的治疗法则，应用具有补肾活血作用的中药复方益肾达络饮治疗MS。本研究从理论研究和临床研究两个方面进行了探索。.理论研究提出“治未病”思想指导MS诊治；并对中医药治疗MS的研究进展进行整理；分析整理不同MS实验动物模型的优缺点，为今后的研究奠定了重要的基础。实验研究方面复制实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）复发－缓解模型，通过研究EAE小鼠CXCR4信号通路介导趋化T淋巴细胞进入CNS的作用，分析CXCR4信号通路对T细胞介导自身免疫反应的影响。研究结果表明，CXCR4信号转导通路介导的T细胞免疫反应在EAE发病中起着重要的扳机作用，抑制CXCR4信号转导通路就可以有效抑制EAE的发病；EAE小鼠IL-4、IL-2促进T细胞增殖，CXCR4高表达激活CXCR4配体 CCL22，并启动下游MCP-1、PI3K、PLC、PKC、FOXO3a、p-JAK1、 p-STAT1、p-STAT3、NF-κB因子，诱导T细胞通过血脑屏障，导致EAE的发病。具有益肾活血作用的中药复发益肾达络饮具有有效抑制EAE的作用，且具有多靶点调整CXCR4/CCL22信号通路及其下游细胞因子的作用，达到抑制T细胞向中枢神经系统迁移，而且中药复发益肾达络饮的作用机制与糖皮质激素醋酸泼尼松有所不同。. 川芎是传统活血中药，川芎嗪（Tetramethylpyrazine，TMP）是从中得到的主要生物活性成分。课题组在体内和体外研究了TMP对由CoCl2诱发的缺氧神经保护作用机制。结果表明TMP能够预防在PC12细胞和大鼠中由CoCl2诱发的神经毒性，抑制线粒体的功能紊乱和线粒体凋亡分子的出现。TMP的神经保护活动涉及两个途径：一条是Nrf2的增加以及GSH的r-谷氨酰半胱氨酸连接酶介导调节的催化亚基的增加，另一种是对缺氧诱导因子1α的抑制以及NOX2介导产生的ROS的抑制。这些结果为了解缺氧相关的神经退化性疾病的发病机理和治疗提供了新的途径。本课题的研究成果对中药防治MS的临床应用奠定了良好的基础，为未来研究TMP的神经保护作用奠定了基础。