基于组蛋白乙酰化探讨益肾解毒通络法对EAE小鼠星形胶质细胞微环境影响机制的研究

MS/EAE is an autoimmune disease in the central nervous system. Axonal degeneration of myelin is often with disabling neurological impairment. Astrocytes are one of the important factors affecting the damage of neurons and axons. How to reduce the formation of glial scars and promote the secretion of neurotrophic factors after EAE is a hot issue in the field of nerve regeneration.On the baseline of epigenetic modification adjusting astrocytes microenvironment,and on based for cell receptors P2Y1, from two aspects of the cell and the overall, using pathomorphology and molecular biology technique, we will explore the mechanism of Yishen Jiedu Tongluo method effecting histone of epigenetic modifications that can effect cell signal transduction pathway、Tlymphocyte subsets、proinflammatory cytokine and neurotrophic factor secretion.We will study the effects of Receptor - signaling pathway – cytokines. So we can analyze the role of the overall effects on body signal network by Yishen JieduTongluo method,research the overall Perpetual motion states of Organism’ self-Adaptive and self-organizing,and explore the scientific connotation of TCM’ Yin-Yang unity view.The experiment can reveal the pathogenesis of EAE and the overall adjustment mechanism of the neural immune function by TCM treatment.Through the rearch we provide new thoughts and means for controllable reactive astrocyts,adjusting microenvironment of astrocyts,and restoration fuction of EAE.

MS/EAE是中枢神经系统自身免疫性疾病，由于髓鞘脱失轴索变性常伴随致残性神经功能损伤。星形胶质细胞是影响受损神经元及轴突再生的重要因素之一，如何减少EAE病变后胶质瘫痕的形成以及促进神经营养因子分泌，是神经再生领域关注的热点问题。本项目拟从表观遗传修饰调整星形胶质细胞微环境角度入手，以细胞受体P2Y1基点，从细胞和整体两个层面探究益肾解毒通络法是否通过β-arrestin1影响组蛋白表观遗传修饰对细胞信号转导通路、T细胞亚群变化、促炎因子和神经营养因子分泌产生作用。研究对膜受体-信号通路-细胞因子的系列影响,以此综合分析益肾解毒通络法对机体信号网络的整体调控作用，研究机体自适应自组织的整体恒动状态，探寻中医阴阳平衡科学内涵，揭示EAE的发病机制及中医治疗对机体神经免疫功能的整体调节机理，为实现可控性反应性星形胶质化、调节星形胶质细胞微环境平衡、EAE的功能恢复提供新的思路和手段。

多发性硬化（MS）是遗传易患个体与环境因素相互作用而发生的自身免疫性疾病，目前尚无特效治疗药物，中医药在治疗MS方面具有一定优势，但是其治疗机理尚不明确。本项目通过制作实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）小鼠模型研究MS，通过脂多糖诱导小鼠原代星形胶质细胞形成的炎症模型模拟中枢神经系统炎性环境，从体外细胞和体内整体两个层面，以星形胶质细胞膜受体为研究靶点，以表观遗传修饰为研究基线，系统研究益肾解毒通络法对EAE小鼠所形成的的各方面影响，从而分析益肾解毒通络法对机体信号网络的整体调控作用。.通过腺相关病毒包装质粒抑制小鼠体内β-arrestin1表达，慢病毒包装质粒感染星形胶质细胞，相应受体拮抗剂拮抗膜受体A1AR与P2Y1的表达，基于相应药物进行干预，测定IL-6、IL-17、IL-27等促炎因子与IL-35等抑炎细胞因子、PKC/ERK、cAMP/PKA/CREB、RHO/ROCK等信号转导通路、T细胞亚群变化、GDNF神经营养因子、组蛋白H3与H4的乙酰化水平等，探讨益肾解毒通络法治疗EAE的机制。.本研究得出初步结论，β-arrestin1作为接头蛋白和支架蛋白，通过星形胶质细胞膜受体P2Y1和A1AR，将信号直接从细胞膜传到细胞核，还影响与之相关的信号转导通路，进而导致下游基因表达发生变化，启动通过影响组蛋白修饰而调节基因转录的表观遗传学机制，使得细胞因子分泌随之改变，T细胞亚群变化，继之出现星形胶质细胞微环境的变化。益肾解毒通络法通过β-arrestin1影响组蛋白表观遗传修饰，以此对膜受体-信号通路-细胞因子产生系列影响，从而缓解EAE临床症状，减轻中枢神经系统炎症，修复轴突损伤。研究对于益肾解毒通络法治疗MS的机制做了进一步的探讨，以期为中医药治疗MS以至其他中枢神经系统疾病提供研究思路。