趋化因子CCL25及受体CCR9过表达在重症肌无力患者胸腺异常增生中的作用

重症肌无力（MG）是自身免疫性疾病，多数伴有胸腺异常增生。本研究前期工作应用基因芯片筛选和荧光定量PCR证实了趋化因子CCL25及其受体CCR9在MG患者胸腺组织高表达，并证实MG胸腺组织提取液对CCR9+胸腺细胞有趋化作用，且能被anti-CCR9抗体阻断。为深入探讨CCL25/CCR9在MG胸腺异常中的作用，采用免疫组化、流式细胞术观察MG患者CCL25、CCR9在胸腺表达的组织定位和细胞类型；通过对胸腺上皮细胞（TEC）的分离鉴定和CCL25基因转染和敲除，分析MG患者TEC产生CCL25、P-选择素、ICAM-1、VCAM-1以及趋化作用及CCL25不同表达水平对TEC功能的影响；通过建立TEC移植小鼠模型进行体内实验，探讨CCL25/CCR9对胸腺细胞迁入、分化成熟及输出的影响。最后通过CCR9受体拮抗剂的体内外实验，探讨基于CCL25/CCR9对MG的治疗作用。

重症肌无力（MG）是由AChRab介导的自身免疫病，多数患者胸腺组织中出现生发中心、AchR活化的T细胞和富含产生抗-AchR抗体的B细胞。趋化因子CCL25构成性表达于胸腺，其受体CCR9表达于共同淋巴细胞前体（CLP）和不同分化阶段的胸腺细胞。我们通过基因芯片发现MG患者胸腺CCL25及CCR9表达量均显著增高，采用荧光定量PCR对15例胸腺切除MG患者进行验证，与芯片结果一致。通过免疫组化和共聚焦显微镜发现MG胸腺CCL25+和CCR9+细胞分布与对照组不同，CCL25+细胞不仅分布在皮质，也在髓质出现，尤以皮髓交界处表达明显；CCR9阳性细胞在MG患者胸腺皮质和髓质均可见到，被膜下区CCR9强阳性细胞聚集更为明显，且被膜下的CCR9+细胞同时也表现为CCR7+。FCM结果显示，MG患者胸腺CD4+CD8+ DP细胞比例降低（MG组74.25±2.47，对照组87.98±2.68）而CD4+CD8- SP细胞比例增加（MG患者12.85±1.67% ，4.06±1.38%）；CCR9高表达于MG胸腺的CD4-CD8- DN胸腺细胞(MG组3.13 ± 0.12%，对照组0.81 ± 0.05% ) 和CD4+/CD8+ SP胸腺细胞（MG组CD4+SP 4.28 ± 0.23%，对照组1.83 ± 0.094%, MG组CD8+SP 3.29 ± 0.14% ，对照组0.83 ± 0.074% )，与正常胸腺细胞CCR9高表达于DP细胞显著不同。ELISA结果显示MG患者胸腺组织提取液中CCL25含量增加（MG组,45.12±11.63ng/mg，对照组10.33±3.71，P<0.01）。通过建立TEC细胞系、CCL25-慢病毒载体感染TEC和细胞趋化试验，观察到MG胸腺组织提取液、MG TEC上清和CCL25慢病毒感染TEC上清对胸腺细胞的趋化作用增强，尤其对DN胸腺细胞（CD4-CD8-）的作用最为明显，且能部分被CCR9单抗阻断。通过SCID小鼠建立的人胸腺-T细胞前体模型的体内实验也证实，CCL25的表达量影响T细胞迁移和分化。综上，CCL25在MG患者胸腺上皮细胞和CCR9在不同亚群胸腺细胞的表达增高和分布异常是影响CLP从骨髓迁入胸腺和影响胸腺细胞胸腺内迁移分化的原因之一，进一步对其机制的深入研究有望成为基于CCL25/CCR9靶点治疗的理论基础