结肠定位释药叶酸受体介导的姜黄素固体自微乳化载体的构建及其作用

由于叶酸受体表达分布的特点，已成为肿瘤药物治疗与检测的重要靶点。本课题利用人体正常结肠粘膜或结肠癌细胞均存在能与叶酸分子高亲和力结合的叶酸受体，以姜黄素为模型药物，构建叶酸修饰的固体自微乳载体，利用能在胃肠液稳定而在结肠降解酶作用下降解的壳聚糖胶囊到达结肠，载体从胶囊释放后在结肠中水的作用下形成微乳，利用与结肠粘膜叶酸受体的结合作用，将药物通过内吞作用进入体内，以促进药物口服吸收；又由于结肠癌粘膜被破坏，癌变细胞暴露于结肠壁，通过癌变细胞表面过度表达的叶酸受体介导，使药物直接进入癌细胞，从而达到口服结肠癌细胞的靶向治疗作用，为利用叶酸受体介导口服结肠癌细胞的靶向给药提供试验基础。

根据合同书的要求，研制了叶酸受体靶向的姜黄素自微乳（胶囊）制剂。选择了对姜黄素溶解度较高的辅料并通过三元相图筛选出自微乳处方所用的油相、表面活性剂和助表面活性剂；以溶解度和粒径为指标用单纯形网格法确定了各组分比例，优化处方为：表面活性剂(Cremophor EL)：57.5%，助表面活性剂(Transcutol HP)：32.5%，油相(Capryol 90)：10%。根据溶出速度确立了固体自微乳制剂的处方。将含叶酸类脂材料分别作为表面活性剂，加入到自微乳优化处方中，利用大鼠在体结肠循环考察了结肠粘膜对叶酸修饰自微乳制剂的吸收率，确定当制剂中加入的叶酸-聚乙二醇-胆固醇半琥珀酸酯与Cremophor EL 的比值为1:100时能显著增加大鼠结肠粘膜对姜黄素的吸收。理化性质研究表明叶酸修饰姜黄素自微乳用水稀释后得到的微乳，在透射电镜下液滴呈球形，粒径31.1 nm，zeta电位为-6.56 mV。体外释放表明叶酸修饰姜黄素自微乳结肠溶胶囊（FCSC）能在结肠部位释放姜黄素。荧光显微镜和流式细胞术考察了制剂的体外肿瘤细胞的摄取与靶向作用，结果表明FCSC可通过与叶酸受体的结合达到对肿瘤细胞的靶向作用，通过叶酸受体介导的内吞作用增大肿瘤细胞对药物的摄取。大鼠药代动力学实验表明大鼠口服FCSC的曲线下面积大于非靶向制剂，半衰期延长，相对于非靶向制剂、姜黄素原料药的生物利用度为149%和734%，说明叶酸脂质材料的加入及自微乳制剂使姜黄素的口服吸收显著提高。活体成像实验表明大鼠口服FCSC可使姜黄素浓集于结肠部位。体内抗肿瘤实验表明口服FCSC对于大鼠结肠癌模型有一定的抑制作用。 .在基金的支持下，还进行了以下姜黄素纳米制剂的研究：1.结肠定位释药Eudragit® S100包覆姜黄素果胶钙微球制剂；2.姜黄素微乳离子敏感型原位凝胶剂及其鼻腔给药；3.姜黄素纳米结晶口服制剂；4.姜黄素PBCN纳米粒；5.姜黄素Pluronic P123与F68混合胶束；6.整合素介导的姜黄素PEG-PLA纳米胶束。.在基金支持下，共发表文章9篇（SCI收录7篇），获授权专利4项，培养研究生5名，基本完成了基金合同书计划内容。