RBP4对血管平滑肌细胞增殖、迁移及炎症因子表达的影响及机制

代谢综合征(metabolic syndrome)是包括肥胖、高血压、胰岛素抵抗及血脂紊乱在内的一类临床征候群, 其诱发的血管病变如动脉硬化等是心血管疾病的重要病理基础。平滑肌细胞在血管病变中起关键作用，其增殖、迁移及炎症激活参与血管病变的发生发展。脂肪因子视黄醇结合蛋白4（RBP4）是肝脏和脂肪组织分泌的视黄醇的特异性载体，通过调控糖脂代谢及胰岛素敏感性参与肥胖及胰岛素抵抗的病理生理过程。临床研究提示RBP4可能通过调控脂代谢如VLDL及LDL，与代谢综合征血管病变相关，但RBP4对血管的直接作用尚未见报道。我们的实验显示RBP4可直接影响血管内皮细胞功能。本研究拟以血管平滑肌细胞为研究对象，进一步分析RBP4对其增殖、迁移以及炎症因子表达的影响及分子机制，以期探讨RBP4在代谢综合征血管病理生理过程中的作用。研究的完成将有助于为代谢综合征血管病变的病理机制及防治提供新的理论和实验依据。

临床研究提示脂肪因子视黄醇结合蛋白4（RBP4）与代谢综合征血管病变相关，但RBP4对血管的直接作用尚未见报道。本研究分析RBP4对血管平滑肌细胞增殖、迁移以及炎症因子表达的影响及分子机制，并进一步研究其在动脉粥样硬化发展中的作用。研究结果显示：1）在大鼠平滑肌细胞中，RBP4呈时间及浓度依赖性方式诱导炎症基因COX2及iNOS表达，此诱导作用不依赖于重组蛋白中所含的微量的细菌内毒素。并且RBP4诱导NF-κB p65亚基转位入核及NF-κB报告基因活性增高。腺病毒介导IκBα过表达则显著抑制RBP4对COX2及iNOS的诱导作用。同时RBP4处理平滑肌细胞也可促进MAPKs磷酸化，采用MAPKs抑制剂预处理血管平滑肌细胞则可显著抑制RBP4对iNOs及COX2的诱导作用。2）重组人RBP4呈剂量依赖性地诱导大鼠血管平滑肌细胞的迁移，而蛋白中所含同等浓度的细菌内毒素对细胞迁移无显著影响。RBP4处理细胞显著增加了Akt磷酸化，PI3K抑制剂LY294002预处理细胞则显著抑制了RBP4的促迁移作用。3）采用细胞计数和流式细胞仪检测结果示RBP4对平滑肌细胞细胞增殖及细胞周期无显著影响。4）apoE基因敲除小鼠血浆RBP4水平升高，而且，高脂饮食以时间依赖性方式诱导apoE小鼠血浆RBP4升高。免疫组织化学染色结合免疫荧光双染色方法显示RBP4存在于人及小鼠动脉粥样硬化病损的血管平滑肌细胞中。ox-LDL 和TNF-a可以时间及浓度依赖方式诱导体外培养大鼠的主动脉平滑肌细胞中RBP4表达。经过3年的努力，我们圆满完成了本项目的研究计划，并且根据国内外最新动态及具体实验结果，及时调整研究方向，进一步研究了apoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块部位RBP4表达及定位情况，以明确RBP4与动脉粥样硬化的关系。本项目的完成将有助于为代谢综合征血管病变的病理机制及防治提供新的理论和实验依据。经过3年的努力，本项目取得了一定的研究成果，在本项目的资助下，我们参加2010年世界心脏病学大会并发表摘要一篇（见附件），已投稿文章2篇（Journal of Molecular and Cellular Cardiology、Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology），目前正在积极修稿中。