水泡口炎病毒（VSV）基质蛋白（MP）抗卵巢癌化疗耐药的机制研究

卵巢癌的死亡率在女性生殖器恶性肿瘤中居首位。由于对化疗耐药的普遍存在，近30年来卵巢癌患者的5年生存率一直没有显著的提高。卵巢癌细胞不能顺利进入凋亡程序被认为是导致化疗耐药的主要原因。前期研究中我们发现，水泡口炎病毒的基质蛋白（M蛋白）具有在体内及体外诱导对顺铂耐药的卵巢癌细胞凋亡的功能，结果发表在Ann Oncol.（2007年影响因子4.875）。在此基础上，本项目中我们拟通过全基因组表达芯片全面了解化疗耐药及敏感卵巢癌细胞之间的基因表达差异，以及M蛋白处理前后耐药细胞内部的基因表达差异，并综合运用分子生物学及细胞生物学等方法系统研究M蛋白克服化疗耐药、诱导卵巢癌细胞凋亡的具体分子机制，为最终克服卵巢癌化疗耐药奠定基础，具有重要的学术、经济和社会意义。

卵巢癌死亡率居妇女生殖系统恶性肿瘤的首位。由于化疗耐药的普遍发生，近30年来晚期卵巢癌患者的5年生存率一直无改善。本研究目的为探讨卵巢癌顺铂耐药的机制以及水泡口炎病毒基质蛋白抗顺铂耐药卵巢癌的机制。实验中拟通过基因芯片技术对顺铂敏感及耐药细胞基因表达的差异及耐药细胞经基质蛋白处理前后基因表达差异进行分析，以找出基质蛋白抗肿留及抗耐药的机制。结合已知研究成果以及试验中基因芯片结果，我们选定ALDH1、FAK（PTK2）、GCH1、BAIAP2、HIG2、MYC为候选关键作用分子，并通过荧光定量RT-PCR验证了这些基因的表达变化。在候选的关键分子中，我们首先选择了ALDH1（醛脱氢酶）来进行下一步实验。因为ALDH1是重要的卵巢癌肿瘤干细胞标记分子之一。而肿瘤干细胞常常能够干扰化疗药物的作用，被认为是导致化疗治疗失败的重要原因之一，也是目前肿瘤研究的热点。芯片结果提示ALDH1在顺铂耐药的卵巢癌细胞中高表达，而基质蛋白能下调耐药细胞株中ALDH1的表达。在对ALDH1基因进一步研究中进行了体外和体内试验。体外实验发现用ALDH1的小分子抑制剂处理顺铂耐药细胞能增强耐药细胞对顺铂的敏感性，促使其凋亡增加。同时，我们通过RNA技术下调了ALDH1在顺铂耐药细胞中的表达。结果显示，ALDH1的表达被抑制后，耐药细胞对顺铂的敏感性显著增加。在小鼠的体内实验中发现，我们用顺铂和ALDH1siRNA联合治疗荷瘤小鼠，能逆转肿瘤细胞的耐药性，有效抑制小鼠移植肿瘤的生长。我们在用原位荧光TUNEL免疫组化染色方法检测肿瘤组织中细胞凋亡的情况时发现，肿瘤负荷的降低与肿瘤细胞凋亡的增加密切相关。体内试验进一步证实ALDH1在顺铂耐药中发挥了重要作用。本研究的意义在于发现了一系列与顺铂耐药相关的靶分子，并明确了顺铂耐药与卵巢癌干细胞基因表达增加有关。同时发现水泡口炎病毒基质蛋白可通过多个通路抑制卵巢癌细胞的生长，并通过抑制肿瘤干细胞基因的表达来逆转卵巢癌细胞的耐药，为卵巢癌的治疗及克服肿瘤耐药现象提供了新的思路，具有较大的临床价值。