MSC-MV通过传递miR-200靶向作用MAPK-snail通路发挥肾衰竭的修复作用

Our previous study found that the microvesicles derived from mesenchymal stem cells (MSC-MV) had the effect in repairing renal injury. Meanwhile, more than 276 kinds of miRNA including the relative high content of miR-200 family were detected in MSC-MV. Recently study demonstrated that miR-200 could directly inhibit the gene expression of Map3k1, Mapk12 and Snail1 to attenuate renal fibrosis. Based on the previous research, this aim of these project is to further investigate the possible mechanisms and signal pathway in inhibiting renal fibrosis by MSC-MV. This study will focus on:(1)exploring the function of miR-200 delivered by MSC-MV in the renal restoration of kidney injury; (2) determining whether miR-200 delivered by MSC-MV could directly inhibit MAPK-snail pathway to repair renal fibrosis . This project will provide further theoretical basis for the exploration of new methods of stem cell therapy for renal fibrosis.

我们前期研究提示间充质干细胞(MSC)来源的微泡(MV)具有肾损伤修复作用，同时我们在MSC-MV中检出276种miRNA，其中包括含量较高的miR-200家族。最新研究显示miR-200可以直接靶向抑制Map3k1, Mapk12, Snail1基因的表达，从而发挥纤维化的抑制作用。本项目在前期研究基础上，进一步摸索MSC-MV抑制肾脏纤维化的机制及其相关信号通路。主要研究内容为：(1)证明MSC-MV通过传递miR-200发挥抑制肾脏纤维化的作用；(2)探明MSC-MV是否通过传递miR-200直接靶向MAPK-snail通路而逆转肾间质纤维化。本项目将为探索干细胞治疗慢性肾脏纤维化的新方法提供进一步的理论依据。

研究背景：我们前期研究提示间充质干细胞(MSC)来源的微泡(MV)具有肾损伤修复作用，同时我们在MSC-MV中检出276种miRNA，其中包括含量较高的miR-200家族。最新研究显示miR-200可以直接靶向抑制Map3k1, Mapk12, Snail1基因的表达，从而发挥纤维化的抑制作用。本项目在前期研究基础上，旨在研究miR-200c在肾脏纤维化中的作用及其可能的机制。.研究内容：本研究基于肾脏纤维化模型，体外实验通过TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞纤维化，转染miR-200c mimic或miR-200c inhibitor，通过western blot及细胞免疫荧光检测纤维化相关指标，同时荧光素酶报告基因检测确定miR-200c的靶基因，进而验证其在相关通路中的机制。体内实验通过建立单侧输尿管梗阻（UUO）小鼠模型，尾静脉隔天注射miR-200c agomir，7天或14天后检测相关指标的变化。 .重要结果：在TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞纤维化模型中，过表达miR-200c后，α-SMA表达下降，E-cadherin表达上调，抑制miR-200c后，结论相反。通过荧光素酶报告基因检测发现，MAP3K1是miR-200c的靶基因，siMAP3K1可以降低肾脏纤维化程度，同时，过表达或抑制miR-200c后，MAPK信号通路中p-ERK1/2，p-p38的表达分别减少或增加。此外，相较UUO模型鼠，UUO小鼠尾静脉重复注射miR-200c agomir后，肾功能指标下降，E-cadherin的表达增加，α-SMA表达下降（P<0.05）。.结论：miR-200c可能通过抑制MAPK通路来延缓肾纤维化进程，从而为临床延缓肾脏疾病提供理论基础。.科学意义：本研究通过探讨miR-200c在肾脏纤维化中的作用及其机制，为今后临床延缓及治疗CKD提供理论基础。