纤维蛋白原和纤溶酶基因变异导致肺栓塞形成的分子机制

目前肺栓塞已成为住院患者死亡的常见原因之一。多年来对肺栓塞的研究主要集中在人体凝血功能的改变，而对纤维蛋白原和纤溶系统的研究几乎空白。在我们的前期研究中，发现无论患者的纤维蛋白原存在基因变异，或者纤溶酶存在导致活性降低的基因变异，都可以导致纤溶酶不能有效降解纤维蛋白，从而形成静脉血栓，导致肺栓塞。这类肺栓塞患者同时也出现对常规溶栓治疗不敏感，往往预后较差。由此提出：纤维蛋白原和纤溶酶的基因多态性与肺栓塞形成密切相关。本课题拟对纤维蛋白原的三条链和纤溶酶的进行全基因测序，筛选所有的变异位点；然后把不同的变异导入到酵母表达系统，体外分析变异对相应结构和功能的影响，揭示基因变异导致肺栓塞的分子机制；然后与临床资料相结合，研究不同变异在肺栓塞患者中的比例，为肺栓塞从分子水平上分型提供理论依据，并为其临床预防、诊断和治疗提供新的策略。

本研究采用目标基因捕获和高通量测序技术，对全面分析肺栓塞患者的纤维蛋白原α、β和γ 链，纤溶酶各个结构域可能存在的变异，以及不同基因变异对蛋白的结构和功能造成的影响，为临床建立肺栓塞综合评价模式。.本研究首次构建：.（1）运用目标区域捕获芯片、Solexa高通量测序等技术对肺血栓栓塞症(PTE)候选疾病相关基因所有外显子区域进行全面分析，较系统地寻找我国汉族人群PTE易感基因及其相关变异。.（2）建立基因检测方法，分段分析纤维蛋白原α、β和γ 链，纤溶酶各个结构域在基因组中的外显子部分。.（3）建立纤维蛋白原体外表达系统，能够将基因检测发现的相应变异转入到相应的表达质粒中，从而在体外分析变异对结构和功能造成的影响。.（4）发现纤维蛋白原对血流动力学指标、血管内皮细胞的屏障功能、血管平滑肌细胞的增生或迁移功能都有重要的影响。其编码区的单核苷酸多态性(SNP)所致纤维蛋白原结构或功能的异常与多种临床疾病密切相关。.（5）从“整体”概念出发，检索相关文献，选取人类凝血-抗凝血-纤溶系统、血小板及血管相关途径中50个候选基因，采用Nimblegen 385K序列捕获芯片和Hiseq2000测序仪分别捕获并测定各基因所有外显子序列，用生物信息学及统计学相关方法进行序列比对、数据统计和变异分析，为血栓性疾病提供一个检测平台。