Smad7蛋白泛素化和乙酰化修饰对AAN调节机制的研究

马兜铃酸Ⅰ（AAⅠ）引起的肾损伤受到国内外广泛关注。本项目拟在已完成的国家自然科学基金的基础上，对导致肾纤维化的靶点- - Smad7蛋白进行泛素化和乙酰化修饰，结合已建立的马兜铃酸体内外肾病模型，利用RT-PCR、免疫组织和细胞化学、免疫共沉淀、Western blot对比分析Smad7、Arkadia、UCH37、p300和HDAC1等相关因子在mRNA和蛋白水平上的表达变化；将含Arkadia和HDAC1的siRNA载体转染至细胞和小鼠AAN模型，同时加入蛋白酶体抑制剂，检测Smad7、P-Smad2/Smad3及TβRⅠ表达的变化；流式细胞术观察不同条件下Smad7蛋白复合物的组成随细胞周期的变化。从蛋白水平上研究Smad7蛋白复合物组成的时空表达与AAN发生、发展的关系，进一步确定Smad7在肾纤维化中的作用，为AAN的研究和治疗提供新的实验方法与途径。

马兜铃酸Ⅰ（AAI）引起的肾损伤受到国内外广泛关注。本研究结合已建立的马兜铃酸体内外肾病模型，检测了导致肾纤维化的靶点--Smad7蛋白的泛素化和乙酰化修饰情况。利用RT-PCR、免疫组织和细胞化学、免疫共沉淀、Western blot对比分析Smad7、Arkadia、UCH37、p300和HDAC1等相关因子在mRNA和蛋白水平上的表达变化；将含Arkadia、UCH37和HDAC1的siRNA载体转染至细胞AAN模型，同时加入蛋白酶体抑制剂，检测Smad7、P-Smad2/Smad3及TβRⅠ表达的变化；利用透射电镜技术观察后得知AAI处理小鼠后导致细胞器损伤，细胞核变异；AAN动物模型和细胞模型中泛素化酶Arkadia和去乙酰化酶HDAC1的含量增加，而去泛素化酶UCH37和乙酰化酶p300的蛋白水平降低。因此，AAI可通过乙酰化和泛素化从蛋白水平上调控Smad7的含量进而来调节肾纤维化中进程，为AAN的研究和治疗提供新的实验方法和靶点。